1樓：徐大靈
1 試劑的配製
粗蛋白測定中所用的化學藥品如濃硫酸、鹽酸、氫氧化鈉、硼酸、硫酸銅、硫酸鉀(硫酸鈉)、硫酸銨、蔗糖等均為化學純，標定鹽酸標準溶液用的無水碳酸鈉為基準試劑。在配製試劑前一定要用ph試紙或酸度計檢測一下蒸餾水是否為中性，所用的燒杯、試劑瓶等配液裝置清洗乾淨。
1.1 鹽酸標準溶液的配製
配製的鹽酸標準溶液儘量為低濃度，一般c(hcl)=0.02～0.05mol·l-1。低濃度雖然用量大，但可減少操作誤差和讀數誤差。
配製鹽酸標準溶液一定要嚴格按照標準操作進行，基準無水碳酸鈉已定於270～300℃灼燒至恆重，稱準至0.0001g，做4～6個平行樣，去掉最高值和最低值後取平均值，同時還要做空白試驗。
鹽酸標準溶液的配製量儘量不要太多、使用時間太長，防止水分蒸發和鹽酸揮發而影響其濃度的準確性。
1.2 其他試劑的配製
400g·l-1氫氧化鈉溶液、20g·l-1硼酸溶液、混合指示劑(1g·l-1甲基紅乙醇溶液與5g·l-1溴甲酚綠乙醇溶液等體積混合)等主要是在稱量時要
2樓：
原理是:蛋白質由氨基酸組成，氨基酸含氮，且含量較高，平均在16％左右，故通過測得氮元素的質量就可以粗略算出蛋白的含量，即m（n）/16％即為蛋白含量。一般將蛋白中的氮轉化為氨氣，測的氨氣的量即可。
不足很明顯了，太粗略，不準確。比如三聚氰胺就是鑽了凱氏定氮法的空子。改進的話，改用其他方法，現在誰還用這方法？
考馬斯亮藍法就可以，folin酚法也行。
試述用凱氏定氮法測定麵粉中蛋白質含量的原理，簡要步驟和計算公式。
3樓：匿名使用者
測定蛋白質的方法可分為兩大類：一類是利用蛋白質的物理化學性質來推算，如密度、折射率、紫外吸收、熒光性等；另一類是利用化學方法來計算，如定氮、雙縮脲反應、染料結合反應、酚試劑反應等
主要測定方法有：雙縮脲法、染料結合法、酚試劑法、紫外分光光度法、水揚酸比色法、折光法、旋光法、近紅外光譜法.
目前蛋白質測定最常用的方法是凱氏定氮法，是通過測總氮量來確定蛋白質含量的方法。
凱氏定氮法是通過測出樣品中的總含氮量再乘以相應的蛋白質係數而求出蛋白質的含量,此法的結果稱為粗蛋白質含量：由於樣品中含有少量非蛋白質含氮化合物，如核酸、生物鹼、含氮類脂、卟啉以及含氮色素等非蛋白質的含氮化合物.凱氏定氮法是測定總有機氮量較為準確、操作較為簡單的方法之一，可用於所有動、植物食品的分析及各種加工食品的分析，可同時測定多個樣品，故國內外應用較為普遍，是個經典分析方法[6]。
至今仍被作為標準檢驗方法.此法可應用於各類食品中蛋白質含量測定
凱氏定氮法可分為全量法、微量法及經改進後的改良凱氏定氮法目前通常以硫酸銅作催化劑的常量、半微量、微量凱氏定氮法樣品質量及試劑用量較少，且有一套微量凱氏定氮器。在凱氏法改良中主要的問題是，氮化合物中氮的完全氨化問題及縮短時間、簡化操作的問題，即分解試樣所用的催化劑。常量改良凱氏定氮法在催化劑中增加了二氧化鈦[4].
在理化實驗室,檢驗食品中蛋白質的含量通常用微量凱氏定氮法和全量凱氏定氮法.接下來以大量的試驗來比較微量凱氏定氮法和全量凱氏定氮法的精確度的大小.
1.材料與方法：
1.1試驗材料
1.1.1試驗樣品
麵粉1.1.2試驗藥品和試劑
所有試劑均為分析純；水為蒸餾水或同等純度的水。
硫酸銅；
硫酸鉀；
濃硫酸；
40％氫氧化鈉溶液：稱取40g氫氧化鈉溶於60ml蒸餾水中；
4％硼酸溶液：稱取4g硼酸溶於蒸餾水中稀釋至looml；
0．1mol／l鹽酸標準滴定溶液；
甲基紅次甲基藍混合指示液：將次甲基藍乙醇溶液(1g／l)與甲基紅乙醇溶液(1g／l)按1+2體積比混合。
1.1.3儀器和裝置：
實驗室常規儀器及下列各項：
凱氏燒瓶：500ml；
可調式電爐；蒸汽蒸餾裝置；
鉸肉機：
篦孔徑不超過4nm；
組織搗碎機；
粉碎機；
研缽：玻璃或瓷質；
化學消化器，
凱氏定氮儀，
空氣濾過器
1.2試驗方法
1.2.1微量凱氏定氮法
微量凱氏定氮法的原理
樣品與濃硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，其中碳和氫被氧化為二氧化碳和水逸出，而樣品中的有機氮轉化為氨與硫酸結合成硫酸銨。然後取消化液的1/10加鹼蒸餾，使氨蒸出，用硼酸吸收後再以標準鹽酸或硫酸溶液滴定[2]。根據標準酸消耗量可計算出蛋白質的含量。
包括消化、蒸餾、吸收、滴定四個步驟
1.2.2全量凱氏定氮法
全量凱氏定氮法的原理
樣品與濃硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，其中碳和氫被氧化為二氧化碳和水逸出，而樣品中的有機氮轉化為氨與硫酸結合成硫酸銨。然後取消化液的全部加鹼蒸餾，使氨蒸出，用硼酸吸收後再以標準鹽酸或硫酸溶液滴定。根據標準酸消耗量可計算出蛋白質的含量。
包括消化、蒸餾、吸收、滴定四個步驟
2 分析過程
試樣製備：固體樣品：取有代表性的樣品至少200g，用研缽搗碎、研細；不易搗碎、研細的樣品應切(剪)成細粒；幹固體樣品用粉碎機粉碎；液體樣品：
取充分混勻的液體樣品至少200g。粉狀樣品：取有代表性的樣品至少200g(如粉粒較大也應用研缽研細)，混合均勻；糊狀樣品：
取有代表性的樣品至少200g，混合均勻；固液體樣品：按固、液體比例，取有代表性的樣品至少200g，用組織搗碎機搗碎，混合均勻；肉製品：取去除不可食部分、具有代表性的樣品至少200g，用鉸肉機至少鉸兩次，混合均勻。
上述試樣應放入密閉玻璃容器中，於4°c冰箱內貯存備用，儘快測定。
2.1微量凱氏定氮法的分析過程
2.1.1樣品消化 :
步驟：準確稱取一定量的樣品，加入硫酸銅0.5g、硫酸鉀10g和濃硫酸20ml、玻璃珠數粒→小心移入乾燥潔淨的500ml凱氏燒瓶中(固體或粉末用紙捲成紙筒送入)，輕輕搖勻，以45º斜支於有小孔的石棉網上→用電爐以小火加熱(或先燒瓶放在距電爐較遠處)，待內容物全部炭化、泡沫停止產生後→加大火力(或將燒瓶放在電爐上)，保持瓶內液體微沸→至液體變藍綠色透明後→繼續加熱微沸30min→關閉電爐，取下燒瓶、冷卻→轉移至100ml容量瓶中，加水定容
2.1.2 蒸餾與吸收：
按圖安裝好微量定氮蒸餾裝置。於水蒸氣發生瓶內裝水至2/3容積處，加甲基橙指示劑數滴及硫酸數毫升，以保持水呈酸性，加入數粒玻璃珠。在接受瓶中加入10ml40g/l硼酸及2滴混合指示劑，將冷凝管下端插入液麵以下。
準確吸取消化液10ml於反應管內，經漏斗再加入10ml氫氧化鈉溶液，用少量蒸餾水沖洗漏斗，夾好漏斗夾並水封，加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水進行蒸餾。指示劑變綠色後繼續蒸餾10min，將冷凝管尖端提離液麵繼續蒸1min
4樓：專注於教育的張老師
回答您好，您的問題由我來為您解答，我正在整理答案，請稍等一會兒哦 親！
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在理化實驗室,檢驗食品中蛋白質的含量通常用微量凱氏定氮法和全量凱氏定氮法.接下來以大量的試驗來比較微量凱氏定氮法和全量凱氏定氮法的精確度的大小.
1.材料與方法：
1.1試驗材料
1.1.1試驗樣品
麵粉1.1.2試驗藥品和試劑
所有試劑均為分析純；水為蒸餾水或同等純度的水。
硫酸銅；
硫酸鉀；
濃硫酸；
40％氫氧化鈉溶液：稱取40g氫氧化鈉溶於60ml蒸餾水中；
4％硼酸溶液：稱取4g硼酸溶於蒸餾水中稀釋至looml；
0．1mol／l鹽酸標準滴定溶液；
甲基紅次甲基藍混合指示液：將次甲基藍乙醇溶液(1g／l)與甲基紅乙醇溶液(1g／l)按1+2體積比混合。
1.1.3儀器和裝置：
實驗室常規儀器及下列各項：
凱氏燒瓶：500ml；
可調式電爐；蒸汽蒸餾裝置；
鉸肉機：
篦孔徑不超過4nm；
組織搗碎機；
粉碎機；
研缽：玻璃或瓷質；
化學消化器，
凱氏定氮儀，
空氣濾過器
1.2試驗方法
1.2.1微量凱氏定氮法
微量凱氏定氮法的原理
樣品與濃硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，其中碳和氫被氧化為二氧化碳和水逸出，而樣品中的有機氮轉化為氨與硫酸結合成硫酸銨。然後取消化液的1/10加鹼蒸餾，使氨蒸出，用硼酸吸收後再以標準鹽酸或硫酸溶液滴定[2]。根據標準酸消耗量可計算出蛋白質的含量。
包括消化、蒸餾、吸收、滴定四個步驟
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試述用凱氏定氮法測定麵粉中蛋白質含量的原理，簡要步驟和計算公式。
5樓：匿名使用者
麵粉與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨。然後鹼化蒸餾使氨遊離，用硼酸吸收後再以硫酸或鹽酸標準溶液滴定。
1、 樣品處理：精密稱取0.2-2.
0g固體樣品或2-5g半固體樣品或吸取10-20ml液體樣品（約相當氮30-40mg），移入乾燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸銅，6g硫酸鉀及20毫升硫酸，稍搖勻後於瓶口放一小漏斗，將瓶以45度角斜支於有小孔的石棉網上，小火加熱，待內容物全部炭化，泡沫完全停止後，加強火力，並保持瓶內液體微沸，至液體呈藍綠色澄清透明後，再繼續加熱0.5小時。
取下放冷，小心加20ml水，放冷後，移入100ml容量瓶中，並用少量水洗定氮瓶，洗液併入容量瓶中，再加水至刻度，混勻備用。取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、濃硫酸同一方法做試劑空白試驗。
2、 裝好定氮裝置，於水蒸氣發生器內裝水約2/3處加甲基紅指示劑數滴及數毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入數粒玻璃珠以防暴沸，用調壓器控制，加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水。
3、 向接收瓶內加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示劑1滴，並使冷凝管的下端插入液麵下，吸取10.0ml樣品消化液由小玻璃杯流入反應室，並以10ml水洗滌小燒杯使流入反應室內，塞緊小玻璃杯的棒狀玻璃塞。將10ml 40%氫氧化鈉溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其緩慢流入反應室，立即將玻璃蓋塞緊，並加水於小玻璃杯以防漏氣。
夾緊螺旋夾，開始蒸餾，蒸氣通入反應室使氨通過冷凝管而進入接收瓶內，蒸餾5min。移動接收瓶，使冷凝管下端離開液皿，再蒸餾1min，然後用少量水沖洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.
01n硫酸或0.01n鹽酸標準溶液定至灰色或藍紫色為終點。 同時吸取10.
0ml試劑空白消化液按3操作。
x =(（v1-v2）*n*0.014)/( m*（10/100）) *f*100% x：樣品中蛋白質的百分含量，g； v1：
樣品消耗硫酸或鹽酸標準液的體積，ml； v2：試劑空白消耗硫酸或鹽酸標準溶液的體積，ml； n：硫酸或鹽酸標準溶液的當量濃度； 0.
014：1n硫酸或鹽酸標準溶液1ml相當於氮克數； m：樣品的質量（體積），g（ml）； f：
氮換算為蛋白質的係數。蛋白質中的氮含量一般為15～17.6%，按16%計算乘以6.
25即為蛋白質，乳製品為6.38，麵粉為5.70，玉米、高粱為6.
24，花生為5.46，米為5.95，大豆及其製品為5.
71，肉與肉製品為6.25，大麥、小米、燕麥、裸麥為5.83，芝麻、向日葵為 5.30。