線粒體膜電位與功能的關係是什麼,jc 1檢測線粒體膜電位時應注意什麼

時間 2021-08-11 16:16:57

1樓:淺若清風

線粒體膜電位越高,線粒體產生的能量越多,促進細胞能量轉換。

線粒體是動植物細胞生成atp的主要地點。

線粒體在產生能量時會將電化學勢能儲存於線粒體內膜,在內膜兩側,若質子及其他離子濃度的不對稱分佈就會形成線粒體膜電位。

擴充套件資料

1、人體的atp有95%為線粒體所提供。

2、合成的atp通過線粒體內膜adp/atp載體與細胞質中的adp交換進入細胞質,參與細胞的各種需能過程,因此線粒體與細胞維持正常功能密切相關。

3、線粒體在呼吸氧化過程中,將所產生的能量以電化學勢能儲存於線粒體內膜,在內膜兩側造成質子及其他離子濃度的不對稱分佈而形成線粒體膜電位。

2樓:妮詩

質子泵存在於線粒體內膜,可將基質內質子泵入膜間隙,質子跨膜轉運使得線粒體膜間隙積累大量質子,形成質子梯度:線粒體膜間隙產生大量正電荷,而線粒體基質產生大量負電荷,從而形成跨線粒體內膜的跨膜電位 (δψ),簡稱為線粒體膜電位。正常線粒體膜電位是維持線粒體進行氧化磷酸化、產生atp的前提,是維持線粒體功能所必需,而凋亡過程中一個重要的變化即是線粒體膜電位的崩潰 (rostovtseva et al.

, 2005)。

jc-1檢測線粒體膜電位時應注意什麼

3樓:淵源

1)原理:jc-1是一種廣泛用於檢測線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential)△ψm 的理想熒光

4樓:百螢生物執事

jc-1樣品分析方案

概述用測試化合物製備細胞

新增jc-1工作溶液(100μl/孔用於96孔板或25μl/孔用於384孔板)在室溫或37℃孵育1小時

讀取 ex / em = 490 / 525nm和490 / 590nm處的熒光強度

注意:以下是我們推薦的活細胞方案。 該方案僅提供指南,實際情況應根據您的具體需求進行修改。

1.準備jc-1工作解決方案:

1.1在高質量無水dmso中製備2至10 mm jc-1的儲備液。 應及時使用原液; 應將任何剩餘的溶液等分並在<-20℃冷凍。

注意:避免反覆凍融迴圈,避免光照。

1.2製備1x jc-1工作溶液:在實驗當天,將jc-1固體溶解在dmso中或將等分試樣的jc-1儲備溶液解凍至室溫。

在hanks和20 mm hepes緩衝液(hhbs)或您選擇的緩衝液(ph 7)和0.02%pluronic®f-127中製備10至30μm1xjc-1工作溶液。 通過votexing很好地混合它們。

注意:jc-1不溶於水,因此它會在溶液中聚集。 建議在將jc-1工作溶液載入到池中之前對其進行過濾。

2.用熒光酶標儀進行jc-1檢測:

2.1用測試化合物細胞培養所需的一段時間(例如,jurkat細胞可以用喜樹鹼處理4-6小時)以誘導細胞凋亡。對於空白孔(沒有細胞的培養基),加入相應量的化合物緩衝液。

2.2將100μl/孔/ 96孔板或25μl/孔/ 384孔板的jc-1工作溶液(來自步驟1.2)加入到細胞板中。

2.3將jc-1裝載板在37℃,5%co2培養箱中培養15-60分鐘。

注意:適當的孵育時間取決於所使用的單個細胞型別和細胞濃度。 優化每個實驗的孵育時間。

2.4從平板上取下jc-1工作溶液,用hhbs或您選擇的緩衝液清洗細胞。 將100μl/孔/ 96孔板或25μl/孔/ 384孔hhbs板加回到細胞板中。

2.5監測ex / em = 490 / 525nm和490 / 590nm處的熒光變化以進行比率分析。

3.用熒光顯微鏡或流式細胞儀進行jc-1測定:

3.1用測試化合物細胞培養所需的一段時間(例如,jurkat細胞可以用喜樹鹼處理4-6小時)以誘導細胞凋亡。

3.2離心細胞,每管取1-5×105個細胞。

3.3在500μljc-1工作溶液中重懸細胞(來自步驟1.2)。

3.4在室溫或37°c下孵育10至30分鐘,避光。

3.5用您選擇的hhbs或緩衝液洗滌細胞。 將細胞重懸於500μlhhbs中以獲得每管1-5×10 5個細胞。

3.6用熒光顯微鏡(使用fitc和tritc濾光片)或流式細胞儀(使用fl1和fl2通道)觀察ex / em = 490 / 525nm和490 / 590nm處的熒光變化。

如何快速檢測分析線粒體膜電位變化?

5樓:

質泵存於線粒體內膜基質內質泵入膜間隙質跨膜轉運使線粒體膜間隙積累量質形質梯度:線粒體膜間隙產量電荷線粒體基質產量負電荷形跨線粒體內膜跨膜電位 (δψ)簡稱線粒體膜電位線粒體膜電位維持線粒體進行氧化磷酸化、產atp前提維持線粒體功能所必需凋亡程重要變化即線粒體膜電位崩潰 (rostovtseva et al., 2005)

流式細胞儀檢測線粒體膜電勢後怎麼看資料啊

6樓:匿名使用者

這個還是和其他的方法類似。用線粒體膜電位敏感的熒光染料先染色,然後對比各個樣本之間的熒光強度的差異

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