熒光素酶報告基因的技術流程

時間 2021-09-04 06:43:25

1樓:布思珈藍

(1) 用生物資訊學方法分析並**啟動子區可能的轉錄因子結合位點。

(2)設計引物用pcr法從基因組dna中克隆所需的靶啟動子片段,將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒(pgl3-basic)中。

(3)篩選陽性克隆,測序。擴增克隆並提純質粒備用。

(4) 擴增轉錄因子質粒,提純備用。同時準備相應的空載質粒對照,提純備用。

(5) 培養293(或其它目的細胞),並接種於24孔板中,生長10-24小時(80%匯合度)。

(6) 將報告基因質粒與轉錄因子表達質粒共轉染細胞。

(7)提取蛋白並用於熒光素酶檢測。

(8) 加入底物,測定熒光素酶的活性。

(9) 計算相對熒光強度,並與空載對照比較。

2樓:匿名使用者

啟動子的**

轉錄因子的**

報告基因質粒的構建

實驗方法及結果分析

用生物資訊學方法分析並**啟動子區可能的轉錄因子結合位點。

設計引物用pcr法從基因組dna中克隆所需的靶啟動子片段,將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒(pgl3-basic)中。

篩選陽性克隆,測序。擴增克隆並提純質粒備用。

擴增轉錄因子質粒,提純備用。同時準備相應的空載質粒對照,提純備用。

培養293(或其它目的細胞),並接種於24孔板中,生長10-24小時(80%匯合度)。

將報告基因質粒與轉錄因子表達質粒共轉染細胞。

提取蛋白並用於熒光素酶檢測。

加入底物,測定熒光素酶的活性。

計算相對熒光強度,並與空載對照比較。

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