1樓：匿名使用者
以為一次提純不可能達到很高的純度。即使是所謂的親和層析，也是永遠有不可忽視的非特異性吸附的。現在比較公認的是至少利用蛋白質兩方面的性質來進行分離，才是收到認可的。
比如親和層析是利用特異性吸附的性質，再加上分子篩利用分子量的差異進行分離。蛋白質的種類太多，性質相近者也很多，所以以一種特性分離是很難分到純的蛋白。
簡單說，就像你找一個人，如果在一個村子裡你可能只需要描述姓名，職業就可以了，但是在一個省裡相同姓名和職業的很可能有重的，也許你加上身高體重就能夠區分。當然，可以根據身份證來尋找，但是前提是必須所有人都被唯一的編號才行，而目前，大部分蛋白質的詳盡西資訊還是未知的。
2樓：匿名使用者
以現在的技術來說已經不用分步提純蛋白質了。一次提純即可得到高純度、大量的目的蛋白。另外分步純化提高損耗，而不是降低損耗。因為處理的次數越多，蛋白損失的越多。
3樓：大西洋季風
其實以前也是有人使用一步純化的，但是純度和得率（主要是純度）太低，分佈純化主要是提高純度的同時降低損耗。
蛋白質分離純化的5種方法主要有什麼?
4樓：科創
蛋白質分離純化常用方法有：
1、沉澱，2、電泳：蛋白質在高於或低於其等電點的溶液中是帶電的，在電場中能向電場的正極或負極移動。根據支撐物不同，有薄膜電泳、凝膠電泳等。
3、透析：利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。
4、層析：a.離子交換層析，利用蛋白質的兩性遊離性質，在某一特定ph時，各蛋白質的電荷量及性質不同，故可以通過離子交換層析得以分離。
如陰離子交換層析，含負電量小的蛋白質首先被洗脫下來。
b.分子篩，又稱凝膠過濾。小分子蛋白質進入孔內，滯留時間長，大分子蛋白質不能時入孔內而徑直流出。
5、超速離心：既可以用來分離純化蛋白質也可以用作測定蛋白質的分子量。不同蛋白質其密度與形態各不相同而分開。
分離和提純蛋白質的基本原理？
5樓：星光中續制導
分離純化蛋白質的方法及原理 （一）利用分子大小。
1、透析：將待提純蛋白質放在透析袋中放在蒸餾水中進行 。原理：利用蛋白質分子不能透過半透膜的性質，使蛋白質和其他小分子物質如無機鹽、單糖、水等分開。
2、超過濾：利用壓力和離心力，強行使其他小分子和水通過半透膜，而蛋白質留在膜上。
3、凝膠過濾層析。原理：當不同分子大小的蛋白質混合物流進凝膠層析柱時，比凝膠網孔大的分子不能進入珠內網狀結構，排阻在凝膠珠以外，在凝膠珠縫隙間隙中向下移動。
而比孔小的分子不同程度地進入凝膠珠內，這樣由於不同大小分子所經歷的路徑不同而到分離。
二）利用溶解度差別。
4、等電點沉澱。原理：不同蛋白質具有不同的等電點，當蛋白質混合物調到其中一種蛋白質的等電點時，這種蛋白質大部分和全部被沉澱下來。。
5、鹽析與鹽溶 。原理：低濃度時，中性鹽可以增加蛋白質溶解度這種現象稱為鹽溶。當離子強度增加，足夠高時，例如飽和或半飽和程度，很多蛋白質可以從水中沉澱出來，這種現象稱為鹽析。
三）根據電荷不同。
6、sds-page 全稱 十二烷基硫酸鈉—聚丙烯醯胺凝膠電泳。原理：通過加熱和sds可以使蛋白質變性，多亞基的蛋白質也解離為單亞基，處理後的樣品中肽鏈是處於無二硫鍵連線的，分離的狀態。
電泳時sds-蛋白質複合物在凝膠中的遷移率不再受蛋白質原有電荷和形狀的影響，而主要取決於蛋白質分子量。所以sds-page常用來分析蛋白質的純度和大致測定蛋白質的分子量。
7、離子交換層析。原理：氨基酸分離常用陽離子交換樹脂，樹脂被處理成鈉型，將混合氨基酸上柱，氨基酸主要以陽離子形式存在，在樹脂上與鈉離子發生交換，而被掛在樹脂上。
分離和提純蛋白質的方法
6樓：世紀網路
1. 前處理。
把蛋白質從原來的組織或溶解狀態釋放出來，保持原來的天然狀態，並不丟。
失生物活性。常用的方法：勻漿器破碎、超生波破碎、纖維素酶處理以及溶菌酶等。
超聲波破碎法：當聲波達到一定頻率時，使液體產生空穴效應使細胞破碎的技術。超聲波引起的快速振動使液體區域性產生低氣壓，這個低氣壓使液體轉化為氣體。
即形成很多小氣泡。由於區域性壓力的轉換，壓力重新升高，氣泡崩潰。崩潰的氣泡產生一個振動波並傳送到液體中，形成剪下力使細胞破碎。
2． 粗分級。
分離可用鹽析、等電點沉澱和有機溶劑分級分離等方法。這些方法的特點是簡便、處理量大，3． 細分級。
樣品的進一步純化。樣品經粗分離以後，一般體積較小，雜蛋白大部分已被除去。進一步純化，一般使用層析法包括凝膠過濾、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等。
必要時還可選擇電泳、等電聚焦等作為最後的純化步驟。
結晶是最後的一步。
蛋白質分離提純方法
7樓：乾萊資訊諮詢
1、鹽析法：
鹽析法的根據是蛋白質在稀鹽溶液中，溶解度會隨鹽濃度的增高而上升，但當鹽濃度增高到一定數值時，使水活度降低，進而導致蛋白質分子表面電荷逐漸被中和，水化膜逐漸被破壞，最終引起蛋白質分子間互相凝聚並從溶液中析出。
2、有機溶劑沉澱法：
有機溶劑能降低蛋白質溶解度的原因有二：其。
一、與鹽溶液一樣具有脫水作用；其。
二、有機溶劑的介電常數比水小，導致溶劑的極性減小。
3、蛋白質沉澱劑：
蛋白質沉澱劑僅對一類或一種蛋白質沉澱起作用，常見的有鹼性蛋白質、凝集素和重金屬等。
4、聚乙二醇沉澱作用：
聚乙二醇和右旋糖酐硫酸鈉等水溶性非離子型聚合物可使蛋白質發生沉澱作用。
常用的蛋白質分離純化方法有哪幾種？各自的作用原理是什麼？
8樓：匿名使用者
分離蛋白質混合物的各種方法主要是根據蛋白質在溶液中的以下性質：1）分子大小；2）溶解度；3）電荷；4）吸附性質；5）對其它分子的生物學親和力等進行分離。
常見的分離提純蛋白質的方法有： 1、鹽析與有機溶劑沉澱：在蛋白質溶液中加入大量中性鹽，以破壞蛋白質的膠體性質，使蛋白質從溶液中沉澱析出，稱為鹽析。
常用的中性鹽有：硫酸銨、氯化鈉、硫酸鈉等。鹽析時，溶液的ph在蛋白質的等電點處效果最好。
凡能與水以任意比例混合的有機溶劑，如乙醇、甲醇、丙酮等，均可引起蛋白質沉澱。2、電泳法：蛋白質分子在高於或低於其pi的溶液中帶淨的負或正電荷，因此在電場中可以移動。
電泳遷移率的大小主要取決於蛋白質分子所帶電荷量以及分子大小。3、透析法：利用透析袋膜的超濾性質，可將大分子物質與小分子物質分離開。
4、層析法：利用混合物中各組分理化性質的差異，在相互接觸的兩相（固定相與流動相）之間的分佈不同而進行分離。主要有離子交換層析，凝膠層析，吸附層析及親和層析等，其中凝膠層析可用於測定蛋白質的分子量。
5、分子篩：又稱凝膠過濾法，蛋白質溶液加於柱之頂部，任其往下滲漏，小分子蛋白質進入孔內，因而在柱中滯留時間較長，大分子蛋白質不能進入孔內而徑直流出，因此不同大小的蛋白質得以分離。6、超速離心：
利用物質密度的不同，經超速離心後，分佈於不同的液層而分離。超速離心也可用來測定蛋白質的分子量，蛋白質的分子量與其沉降係數s成正比。
9樓：yy動感啵啵
凝膠色譜法，根據相對分子量的大小。
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