在提取DNA時,要用75預冷乙醇進行DNA沉澱,請問其機理

時間 2021-05-05 20:57:31

1樓:

可我提取的時候好像是用95%的乙醇沉澱的,而後再用70%的乙醇洗滌。

1.為什麼用無水乙醇沉澱dna?

用無水乙醇沉澱dna,這是實驗中最常用的沉澱dna的方法。乙醇的優點是可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會起任何化學反應,對dna很安全,因此是理想的沉澱劑。

dna溶液是dna以水合狀態穩定存在,當加入乙醇時,乙醇會奪去dna周圍的水分子,使dna失水而易於聚合。一般實驗中,是加2倍體積的無水乙醇與dna相混合,其乙醇的最終含量佔67%左右。因而也可改用95%乙醇來替代無水乙醇(因為無水乙醇的**遠遠比95%乙醇昂貴)。

但是加95%的乙醇使總體積增大,而dna在溶液中有一定程度的溶解,因而dna損失也增大,尤其用多次乙醇沉澱時,就會影響收得率。折中的做法是初次沉澱dna時可用95%乙醇代替無水乙酵,最後的沉澱步驟要使用無水乙醇。也可以用0.

6倍體積的異丙醇選擇性沉澱dna。一般在室溫下放置15-30分鐘即可。

2.在用乙醇沉澱dna時,為什麼一定要加naac或nacl至最終濃度達0.1~0.25mol/l?

在ph為8左右的溶液中,dna分子是帶負電荷的,加一定濃度的naac或nacl,使na+中和dna分子上的負電荷,減少dna分子之間的同性電荷相斥力,易於互相聚合而形成dna鈉鹽沉澱,當加入的鹽溶液濃度太低時,只有部分dna形成dna鈉鹽而聚合,這樣就造成dna沉澱不完全,當加入的鹽溶液濃度太高時,其效果也不好。在沉澱的dna中,由於過多的鹽雜質存在,影響dna的酶切等反應,必須要進行洗滌或重沉澱。

2樓:匿名使用者

實驗過程沉澱的效果最好.

就像用鎢做燈絲一樣,實驗的結果.

在dna的沉澱實驗中,為什麼要把乙醇預冷

3樓:長春北方化工灌裝裝置股份****

核酸酶在體外適宜的條件也可以降解dna,因此提核酸要在低溫下進行,儘量減少dna的降解。所以要將乙醇預冷。

用無水乙醇沉澱dna原因

用無水乙醇沉澱dna,這是實驗中最常用的沉澱dna的方法。乙醇的優點是可以任意比和水相混溶, 乙醇與核酸不會起任何化學反應,對dna很安全,因此是理想的沉澱劑。

dna溶液是dna以水合狀態穩定存在,當加入乙醇時,乙醇會奪去dna周圍的水分子,使dna失水而易於聚合。一般實驗中,是加2倍體積的無水乙醇與dna相混合,其乙醇的最終含量佔67%左右。

因而也可改用95%乙醇來替代無水乙醇(因為無水乙醇的**遠遠比95%乙醇昂貴)。

但是加95%的乙醇使總體積增大,而dna在溶液中有一定程度的溶解,因而dna損失也增大,尤其用多次乙醇沉澱時,就會影響收得率。折中的做法是初次沉澱dna時可用95%乙醇代替無水乙酵,最後的沉澱步驟要使用無水乙醇。也可以用0.

6倍體積的異丙醇選擇性沉澱dna。一般在室溫下放置15-30分鐘即可。

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