PCR反應過程中94與72之間反應體系發生著什麼反應,72與55之間又發生著什麼反應

時間 2021-07-25 18:24:22

1樓:匿名使用者

在94度時,所有雙鏈都是解離狀態,自由碰撞。由於溫度過高,及時互補鏈相遇,也無法形成氫鍵。

當溫度向55度降低時,互補鍊形成氫鍵的機率逐漸增大,由於引物的濃度大大超過以擴增的互補鏈,所以引物和互補鏈的結合開始增多,溫度降低到引物的tm溫度時,理論上已經有一般的互補鏈已經和引物結合了。降到55度時,結合基本完成,taq酶也到位。

溫度升到72度後,taq獲得最適溫度,活性增高,開始合成新鏈。再次升高溫度時,根據模板的長短,如果是原始的模板,taq酶還正在合成新鏈,合成被打斷。如果模板是新合成的,比較短,這時taq已經到了新合成連的末端,並且給末端加了個核苷酸-a.

這個也就是為什麼pcr產物其實是粘性末端:

************-a

a-************

上面一條是5‘-3’,下面是互補 (示意圖)

2樓:匿名使用者

94度是變性溫度,在這個溫度下dna雙鏈開啟,72度是延伸溫度,這個溫度是dna聚合酶進行延伸的溫度,不一定延伸溫度都是72度,不同**的聚合酶延伸溫度不同,這兩個溫度基本都是由使用的聚合酶決定的,55度是退火溫度,是由你設計的引物決定的,在這個溫度下你的引物可以跟模版鏈特異性結合,一圈完整的pcr反應應該是94度變性,dna雙鏈開啟,55度退火,上下游引物分別與你的模板鏈特異性結合,最後是72度延伸,以模板鏈為複製模板,按照5'到3'的方向從引物的3'端開始往後延伸

3樓:

94℃時dna雙鏈發生解鏈,55℃時引物與模板dna鏈結合,72℃時結合了模板鏈的引物以其互補鏈為模板進行延伸。

之間是什麼意思?指降溫的過程?降溫是在很短的時間內完成的,中間的反應幾乎可以忽略不計。

為什么在PCR反應過程中,使用不同的溫度變化

第一個一般在94 95度左右,叫做變性,就是通過加熱開啟雙鏈。第二個溫度點叫做退火,根據引物的tm算出,一般比tm低5度,有利於引物的結合。第三個溫度叫做延伸,一般採用72度。是引物結合後dna聚合酶按照模板合成新的鏈。一分鐘一千個鹼基對。如此迴圈。現在很多pcr都採用2部法,由於採用了不同的dna...

在工作過程中,同事之間配合不夠怎麼辦?

第一步 給領導彙報工作進展。首先,第一步要做的事情就是給領導彙報工作,彙報工作不僅要說明工作的進展,同時還要表明這個工作未來的前景,能夠給公司帶來的收益和對公司未來發展的好處,目的很簡單,就是讓領導意識到這個工作的重要性,並且支援你。在彙報工作的時候,也不能只報喜不報憂,也要讓領導知道你目前遇到的難...

性格與成長過程中每個階段有什麼聯絡

人21歲之前的5個成長階段 社會心理學家將人在21歲之前的成長分成了5個階段。每個階段都有自己的生活主題。如果在某個階段裡,因為某些原因而沒有充分地做到成長,這個人在生活上就會出現一些乏力和困擾現象。這5個階段是 第一階段,0到1歲 信任與不信任。孩子的需要與行為 飢餓 被餵食物 受驚 被擁抱 哭泣...