如何設計熒光定量pcr的引物及taqman探針

時間 2021-08-11 18:15:23

1樓:匿名使用者

用專門的試劑盒來做吧,然後按照說明書操作,挺方便的。我們實驗室以前用的biog熒光定量pcr試劑盒,反應挺靈敏的,實驗結果也不錯,而且染料法和探針法都有。

2樓:匿名使用者

可以用引物設計軟體,primer5就挺不錯的。你是要檢測dna還是rna?探針法檢測dna的話可以用biog super probe kit,檢測rna的話可以用biog super prob one step kit。

普通pcr引物設計和熒光定量pcr引物設計的區別

3樓:匿名使用者

一、方法不同

來1、普自通pcr引物設計:引物的優劣直接關係到pcr的特異性與成功與否。

2、熒光定量pcr引物設計:通過熒光染料或熒游標記的特異性探針,標記跟蹤pcr產物進行實時監測反應,利用與之相適應的軟體對產物進行分析,計算待測樣品模板的初始濃度

二、原理不同

1、普通pcr引物設計:為了找到一對合適的核苷酸片段,使其能有效地擴增模板dna序列。

2、熒光定量pcr引物設計:在pcr反應體系中加入熒光基團,通過熒光訊號不斷累積而實現實時監測pcr全程,然後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在實時熒光定量pcr中,對全程pcr擴增過程進行實時檢測,根據反應時間和熒光訊號的變化可以繪製成一條曲線。

三、注意事項不同

1、普通pcr引物設計:引物應用核酸系列保守區內設計並具有特異性。產物不能形成二級結構。引物長度在15~30鹼基之間。

2、熒光定量pcr引物設計:實時熒光定量 pcr 儀應安放在溼度較低、灰塵較少、遠離水池的平穩檯面上,不能有強光直射,室內應通風良好,無腐蝕性氣體

4樓:南京金益柏生物科技****

實時定量bai的引物設計du要求比較高,可

以按zhi普通引物設計的方法來做,dao但是回設計時要注意擴增的片段答不能太大,最好在250bp-100bp之間。同時要保證這對引物有絕對的特異性,因為要是產生非特異性擴增的話,就不能準確的計量模板量了,這樣就失去了實時定...

5樓:

實時定量的引物抄

設計要求比較高,可以按普通bai引物設計的方法來做,但du是設計時要注zhi意擴增的片段dao不能太大,最好在250bp-100bp之間。同時要保證這對引物有絕對的特異性,因為要是產生非特異性擴增的話,就不能準確的計量模板量了,這樣就失去了實時定...

6樓:

建議來你還是選擇cds區不一自樣的地方設計bai引物吧,這樣可以避免du交叉汙染引起zhi的非特異擴增,dao擴增的序列長度不一定要一樣,每個引物你最好設計兩三對,然後做一個相對定量看看不同引物的擴增效率,選擇比較好的兩對引物做後續試驗,內參基因的引物不需...

7樓:

nf-kbmrna不就是nf-kb的mrna麼 做定量pcr就是測它mrna的表達量啊 nf-kbp65是nf-kb3 nf-kbp52是nf-kb2 所以這兩個還是有區別的 如果你是要檢測65的話

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