什麼是慢病毒包裝,慢病毒包裝的原理

時間 2021-09-03 09:41:11

1樓:匿名使用者

慢病毒載體(lentiviral vector, lvs)是在hiv-1病毒基礎上改造而成的病毒載體系統,它能高效的將目的基因(蛋白質編碼序列、shrna或grna)匯入動物和人的原代細胞或細胞系。慢病毒載體基因組是正鏈rna,其基因組進入細胞後,在細胞漿中被其自身攜帶的反轉錄酶反轉為dna,形成dna整合前複合體,進入細胞核後,dna整合到細胞基因組中。慢病毒載體介導的基因表達、rnai或基因敲除作用持續且穩定,原因是目的基因整合到宿主細胞基因組中,並隨細胞基因組的**而**。

另外,慢病毒載體能有效感染並整合到非**細胞中。大量文獻研究表明,慢病毒載體介導的目的基因長期表達的組織或細胞包括腦、肝臟、肌肉、視網膜、造血幹細胞、骨髓間充質幹細胞、巨噬細胞等。

慢病毒載體不表達任何hiv-1蛋白,免疫原性低,在注射部位無細胞免疫反應,體液免疫反應也較低,不影響病毒載體的第2次注射。

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2樓:運維攻城獅

慢病毒載體(lentiviral vector)較逆轉錄病毒載體有更廣的宿主範圍,慢病毒能夠有效感染非週期性和有絲**後的細胞。慢病毒載體能夠產生表達sirna的高滴度的慢病毒,在週期性和非週期性細胞、幹細胞、受精卵以及分化的後代細胞中表達sirna/mirna,實現在多種型別的細胞和轉基因小鼠中特異而穩定的基因表達的功能性沉默,為在原代的人和動物細胞組織中快速而高效地研究基因功能,以及產生特定基因表達降低的動物提供了可能性。慢病毒作為sirna/mirna的攜帶者,不但具備特異性地使基因表達沉默的能力,而且充分發揮了慢病毒載體自身所具備的優勢,為基因功能的研究提供了更強有力的工具

3樓:

假病毒是將特定的核酸片段包裹於病毒外殼蛋白內,國外已廣泛應用於核酸檢測試劑、基因診斷試劑和科研試劑的對照。國內大多數聲稱假病毒的多為慢病毒,慢病毒仍有感染性;假病毒與慢病毒不同,由ms2噬菌體外殼蛋白包裹外源核酸片段,無感染性,無自主複製能力,生物安全性高,核酸穩定,不易降解。biodai 自主研發的假病毒純化系統,純度高,無外源未包裹dna或rna物質汙染; 病毒樣顆粒無傳染性,不會對實驗人員造成傷害,因此生物安全性好; 滴度高,每毫升可達106拷貝;穩定性好,-20℃儲存6個月以上rna不降解。

慢病毒包裝的原理

4樓:知心姐姐小馬老師

病毒包裝的原理,就是有遺傳物質有外殼蛋白,在細胞內可以指導二者包成病毒。腺病毒擴增,也只能在293a裡擴增,其他的細胞不行.慢病毒載體多是由hiv改造的,野生型的慢病毒載體是可以複製的,但是用於實驗室就只能通過改造使其變為複製缺陷型的。

簡單來說,就是把相應的涉及相應功能的元件進行替換或者刪除。慢病毒包裝系統簡介及應用

一、慢病毒包裝簡介及其用途

慢病毒( lentivirus )載體是以 hiv-1 (人類免疫缺陷 i 型病毒)為基礎發展起來的基因**載體。區別一般的逆轉錄病毒載體,它對**細胞和非**細胞均具有感染能力。慢病毒載體的研究發展得很快,研究的也非常深入。

該載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上,從而達到永續性表達。在感染能力方面可有效地感染神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內皮細胞、幹細胞等多種型別的細胞,從而達到良好的的基因**效果,在美國已經開展了臨床研究,效果非常理想,因此具有廣闊的應用前景。

目前慢病毒也被廣泛地應用於表達 rnai 的研究中。由於有些型別細胞脂質體轉染效果差,轉移到細胞內的 sirna 半衰期短,體外合成 sirna 對基因表達的抑制作用通常是短暫的,因而使其應用受到較大的限制。採用事先在體外構建能夠表達 sirna 的載體,然後轉移到細胞內轉錄 sirna 的策略,不但使脂質體有效轉染的細胞種類增加,而且對基因表達抑制效果也不遜色於體外合成 sirna ,在長期穩定表達載體的細胞中,甚至可以發揮長期阻斷基因表達的作用。

在所構建的 sirna 表達載體中,是由 rna 聚合酶ⅲ啟動子來指導 rna 合成的,這是因為 rna 聚合酶ⅲ有明確的起始和終止序列,而且合成的 rna 不會帶 poly a 尾。當 rna 聚合酶ⅲ遇到連續 4 個或 5 個 t 時,它指導的轉錄就會停止,在轉錄產物 3' 端形成 1~4 個u 。 u6 和 h1 rna 啟動子是兩種 rna 聚合酶ⅲ依賴的啟動子,其特點是啟動子自身元素均位於轉錄區的上游,適合於表達~ 21ntrna 和~ 50ntrna 莖環結構( stem loop )。

在 sirna 表達載體中,構成 sirna 的正義與反義鏈,可由各自的啟動子分別轉錄,然後兩條鏈互補結合形成 sirna ;也可由載體直接表達小發卡狀 rna(small hairpin rna, shrna),載體包含位於 rna 聚合酶ⅲ啟動子和 4 ~ 5 t轉錄終止位點之間的莖環結構序列,轉錄後即可摺疊成具有 1~4 個 u 3 ' 突出端的莖環結構,在細胞內進一步加工成 sirna 。構建載體前通常要通過合成 sirna 的方法,尋找高效的 sirna ,然後從中挑選符合載體要求的序列,將其引入 sirna 表達載體

慢病毒和腺病毒的區別,腺病毒載體與慢病毒載體哪個更好

慢病毒較好些,要看你做什麼實驗了。1.轉染效率 慢病毒較高 2.慢病毒可以實現穩定轉染,腺病毒是瞬時轉染3.包裝量 慢病毒可以包裝4kb左右,不超過8kb的外源基因,腺病毒可以包裝8kb左右外源基因 4.慢病毒操作較方便,週期也短。但腺病毒表達快,1 2天,慢病毒要2 4天。5.安全性 兩個差不多 ...

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