培養基各種成分熔化前的步驟,配製培養基的基本步驟有哪些 應注意什麼問題

時間 2021-09-07 17:02:44

1樓:

1.未開封的乾粉培養基保質較長,已開封的保質期會變短。在瓶體上註明開封日期,用後擰緊瓶蓋。個別品種易變質,如sc增菌液,可冷藏儲存。

2.若干粉培養基結塊或顏色發生改變,不得使用。

3.配製用水可用蒸餾水、去離子水等,電阻率不小於30萬ω•cm,每批應檢查一次。

4.稱量乾粉培養基時為避免汙染,可用專用角匙。

5.自行配製的培養基,各營養成分應按要求順序加入,避免產生沉澱。

6.盛放培養基的容器不宜用銅或鐵鍋,以防其離子混入培養基影響微生物生長。

7.稱量好的乾粉培養基應先溶解再高壓滅菌。

8.自行配製的培養基應完全溶解後再調ph。ph值須冷後測定,因培養基所含成分不同,對冷的和熱的進行測定,其ph值相差很多。

培養基的ph值須精確測定,否則會影響微生物的生長和反應地觀察。另外,ph值不可反覆除錯,否則會影響培養基的滲透壓。

9.需要加熱煮沸的培養基應避免溢位,應邊攪拌邊加熱。燒糊的培養基,其成分已改變,不得使用,應重配。

10.不須高壓滅菌的培養基,配製用水及盛放的容器可於配製前先進行高壓滅菌。

11.配製好的培養基一般採用高壓滅菌,且應立即滅菌,以防微生物生長消耗養分而改變培養基成分。

12.壓力蒸汽滅菌器應定期檢定,平時可用生物指示菌法和化學變色紙片進行滅菌驗證。滅菌時應注意排除冷空氣。含糖或特殊培養基應按要求選好滅菌溫度及時間。

13.滅菌後的培養基應迅速冷卻到所須溫度,避免長時間儲存在滅菌鍋中,造成過度滅菌,影響培養基的營養成分或選擇性效果。

14.配製的培養基的量應恰當,未用完的可註明配製日期,並且應該在最長保值期內用完。配好的培養基應避光、冷藏儲存防止蒸發。

15.凡受汙染長過細菌的培養基,不得滅菌再用。

16.三(雙)糖鐵瓊脂斜面試管塞不宜塞的過緊,否則容易影響斜面鹼性反應;lst如果試管塞過緊,影響排氣,可導致滅菌後小倒管內仍有氣泡。

17.需要加新增劑或抗生素的培養基應即配即用。

18.固體培養基如儲存太久,使用前應再加熱一次,使其表面溼潤以利細菌生長。

2樓:韋康寧

應該先調好ph再進行滅菌,不然滅菌後再調的話,加入的酸或是鹼還是帶菌的。

配製培養基的基本步驟有哪些?應注意什麼問題

3樓:譚銀光

按配方計算培養基中各種成分的用量→稱量,(一般動作要迅速一些,因為其中可能有些成分容易吸潮)→溶化(將稱好的各種成分溶解在水中,如果是固體培養基,需要使用凝固劑,如瓊脂等,熔化時,注意攪拌,防止糊底)→調ph→滅菌(高壓蒸汽滅菌)→倒平板

4樓:慧星之沉

培養什麼?植物細胞培養是現培母液,再滅菌。注意接種是不要染菌。

配置培養基的基本步驟有哪些?應注意什麼問題

5樓:歷竹時棋

快速製作斜面培養基方法

製作培養基斜面是製備菌種不可缺少的一步,傳統的方法是將試管每10支為一組紮成一捆,高壓滅菌後,一支一支地擺成斜面,操作比較煩瑣,佔用面積又多,造成諸多不便。我們在實踐中摸索出一種簡捷快速製備斜面培養基的方法,現介紹如下:

1.將膠合板截成長18釐米(與試管長度相等或略短)、寬9釐米(比並排5支試管直徑的總和略窄)的小塊備用。

2.在並排5支試管上面平置截好的膠合板,再在膠合板上面並排放5支試管,然後將試管的上、下端分別用牛皮紙包好,用線紮緊,使膠合板兩側的試管保持平行,置高壓鍋中滅菌。

3.高壓滅菌後,經自然冷卻,待氣壓降至零時,將高壓鍋的鍋蓋開啟點,當棉塞水分充分蒸發後取出,不用拆捆,直接擺成斜面。大量制斜面時,既快捷又很少佔用空間,非常方便,還便於保溫,減緩凝結速度,充分吸收遊離水分。

4.如需將斜面培養基儲存一段時間,可在滅菌前將聚丙烯塑料袋套在試管外並紮緊袋口,滅菌後取出,直接擺成斜面,可防止水分蒸發。

吉林省梨樹市農村**中專,黎九賢,郭煥富,於愛紅

摘自於2023年第7期《農村實用科技》

6樓:朱理事

培養基的配置應該注意的幾大步驟:

1、常用玻璃儀器的準備製備培養基所用的吸管、錐形瓶、毛細吸管、平皿等玻璃儀器用前要用肥皂水洗刷後用清水沖洗乾淨,晾乾後備用。

(1)平皿用紙或布包好,或裝在金屬盒內,於121℃高壓蒸汽菌3min後烘乾,備用。

(2)試管管口用棉花塞或矽氟塑料試管塞塞好,再用布或報紙包紮好,121℃高壓蒸汽滅菌20℃後烘乾,備用。

(3)吸管及滴管先用少許棉花塞於吸口端(防止汙染物吸出,或橡皮帽內的氣體汙染),然後用紙包後或裝入金屬吸管筒內,於121℃高壓蒸汽滅菌20min後烘乾,備用。其他玻璃器皿均應按上法處理,也應裝金屬筒內160℃乾熱滅菌2h後,備用。

2、培養基的製備及儲存

(1)溶化:一般應放在玻璃器皿或搪瓷齊內。加入蒸餾水,隔水加熱以促其溶解,加熱時應經常攪拌,防止焦結,待其溶解後補足水分。

在使用乾燥培養基時,先將蒸餾水按定量加入容器中,然後稱取一定量培養基幹粉放入水中,靜置10—15min,攪拌,振盪,或延長時間以促進溶解,一般不要熱,必要時加熱,但時間不宜過長,溫度不宜過高,避免某些營養成分被破壞。

(2)校正酸鹼度(調節ph):培養基必須有適當的ph。因此測定ph是培養基配製過程中的重要步驟之一,測定ph的標準溫度為25士2℃。

調節ph可用無菌的1mol/l氫氧化鈉溶液或10%碳酸鈉溶液、1mol/l鹽酸溶液。當調節緩衝液的ph時,宜用6mol/l磷酸或10mol/l氫氧化鉀溶液。滅菌後的ph會比滅菌前的ph升高或降低,一般高壓滅菌前培養基的ph會比最終ph調高0.

2左右,滅菌後基本合適。因此對培養基、緩衝液、試劑在滅菌前後的ph均進行測定,並記下每次ph的測定結果,有助於積累資料考察每種培養基、緩衝液、試劑對滅菌程式的耐受性,從而指導滅菌前ph的調節。乾燥培養基一般已校正過ph,用時也必須再驗證。

測定時,一般用指示劑滴入培養基觀察其顏色的變化,或用ph計校正,如與所需ph不符,可用以上的酸或鹼液加以校正。調整ph後要加熱過濾,使培養基澄清。( 更多質量檢測、分析測試、化學計量、標準物質相關技術資料請參考中國標準物質 www.

rmhot.com)

(3)培養基的分裝:大批量配製時使用的自動分配器須經校準和確認。每次使用前後,均要對分配器的管道系統進行沖洗,在分裝無菌培養基前,則要採用無菌矽膠管。

固體培養基一般分裝在250ml、500ml錐形瓶中,高壓滅菌後根據需要分裝平皿或試管。

平皿:傾注平皿,應在無菌室中放置3—4h,如用塑料平皿須在35℃培養箱 中倒置30—60min。讓水蒸汽自然蒸發。

斜面:製備低層斜面分裝於試管,約佔容積1/5,滅菌後趁熱斜放在細玻璃棒和木杆上,使成斜度,分裝使注意管口和瓶塞上勿沾有培養基,如沾有培養基應用布抹去,以避免汙染。

高層斜面:製備高層斜面分裝於試管,約佔試管容積的1/3,滅菌後趁熱放置成高層短斜面,待其凝固後應用。

分裝好的培養基或緩衝液等及時密封后必須在配製當天(2h內最佳)進行滅菌處理。液體、半固體培養基一般在高壓滅前分裝,約裝試管容積的1/3,在滅菌後還要加其他成分的液體、半固體培養基,滅菌後再分裝於滅菌試管或錐形瓶中。

培養基的滅菌:培養基的滅菌多采用高壓蒸汽滅菌,各種培養基的滅菌時間和壓力,按其成分不同而定。普通培養基採用121℃、103.

42kpa滅菌15min,但容器和裝量較大時,應延長至20min。含糖培養基115℃、68.85kpa滅菌30min。

含糖、血清、 雞蛋等培養基可用流動蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min,連續3d,間歇滅菌。血清或組織液,採用低熱56—58水浴1h,連續5—6d滅菌,一些遇高溫即被破壞的物質如尿素、腹水等,可用細菌過濾器,過濾除菌。高壓滅菌應嚴格按照操作規程執行,必須逐漸加熱,徹底排除滅菌器內的空氣,再逐漸升壓保持預定的壓力和時間,達到全部殺滅微生物。

以上的滅菌時間和溫度要經過驗證確認,如不同型別培養基混合一起滅菌時宜採用115℃、68.85kpa滅菌30min為好。

通過無菌技術為測試製備的每一批培養基其ph在放冷至室溫(25°)後,都應測定。一個扁平的ph計用於培養基表面ph值的測定,浸入式的ph計用於液體的測定。各**商提供的培養基的ph應該在規定的±0.

2的範圍內,除非通過驗證得到更寬的範圍

注意:按配方計算培養基中各種成分的用量→稱量,(一般動作要迅速一些,因為其中可能有些成分容易吸潮)→溶化(將稱好的各種成分溶解在水中,如果是固體培養基,需要使用凝固劑,如瓊脂等,熔化時,注意攪拌,防止糊底)→調ph→滅菌(高壓蒸汽滅菌)→倒平板

1)確認培養基的成分,並精確稱量;

2)加入各個成分的順序;

3)準確調ph;

4) 適當的滅菌方法;

5)無菌條件下分裝.

7樓:果實課堂

製備培養基中有哪些需要注意的點呢

8樓:哈靈培養基廠家

關於培養基配製,當然是注意濃度配比不要搞錯,很多培養基的加料順序有講究,否則會有沉澱產生,有些培養基會有不溶物質,分裝前應搖勻,

不要忘了調節ph值(一般細菌都需要,酵母可能自然ph就行,不過不一定),加熱溶解時儘量不要煮沸,會損失營養物質.

配製培養基的流程

9樓:匿名使用者

不是啊用靈敏度為0.1mg的天平稱取藥品.

(2) 往燒杯加入適量蒸餾水或無菌水.

(3) 將藥品放入燒杯內,並用玻璃棒攪拌使其溶解,難溶時可適當加溫以加速溶解.

(4) 要待一種藥品完全溶解後再加入下一種藥品.

(5) 所加入的藥品應依次加入,直至藥品全部加入溶解為止。 例ms母液的配製

按ms培養基成分表,將各種化學物質歸成幾大類,分別為大量元素、微量元素、鐵鹽、有機物。 大量元素10倍液(mg/l)微量元素1000倍液(mg/l)有機物100倍液(mg/l)鐵鹽nh4no3 1,6500

kno3 1,9000

cacl2?2h2o 4,400

mgso4?7h2o 3,700

kh2po4 1,700hbo3 6,200

mnso4?4h2o 22,300

znso4?7h2o 8,600

ki 830

na2moo4?2h2o 250

cuso4?5h2o 25

cocl2?6h2o 25甘氨酸 200

肌醇 10,000

煙酸 50

維生素b6 50

維生素b1 405.57g fes04?7h2o和7.45g na2一edta溶於1升蒸餾水裡,用時每配1升ms培養基取5ml。

取燒杯注入約600ml蒸餾水,按順序加入藥品並使其溶解,最後加蒸餾水定容至1000ml。取燒杯注入約600ml蒸餾水,按順序加入藥品並使其溶解,最後加蒸餾水定容至1000ml。 2. 培養基製備

配製流程見圖1-2,其順序是:

① 取燒杯或三角瓶注入一定量的蒸餾水,將各種母液按所需容積分別用移液管吸取並混合在一起,然後按要求加入一定量的激素、蔗糖後定容至一定體積。

② 用1mol/l的naoh或hcl調節ph

③ 如制固體培養基,則加入1%左右的瓊脂後加熱煮沸,使其熔化。

④ 分裝,可用漏斗將液狀培養基注入培養瓶,注入量視培養瓶容量大小而定,通常為容器的1/5左右。

⑤ 封瓶口。

⑥ 高壓蒸汽滅菌。120℃,1.5mpa,消毒15~20min。

注意壓力不能太大,時間也不宜過長,否則蔗糖、有機物特別是維生素類物質會在高溫下分解,影響培養基的酸鹼度,瓊脂也會分解,顏色變深且不易凝固。

⑦ 滅菌後的培養基可放入接種室內靜置,讓其降溫後凝固,如需斜面可將其斜放。

配置培養基的基本步驟有哪些?應注意什麼問題

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