開環質粒DNA和線性DNA哪個跑的快

時間 2021-09-11 22:29:14

1樓:z中途

線性dna的電泳遷移速率比開環質粒dna快。

一、詳細講解如下:

1、瓊脂糖凝膠電泳dna 遷移速率與分子大小和構象相關,分子構象越大,摩擦阻力越大,第一條帶是超螺旋帶應該最亮,因為超螺旋結構完整緊密,跑得最快。

2、第二條帶為線性質粒是雙鏈都斷開變成鬆弛的線性dna,不如超螺旋緊密,跑得相對慢 。第三條帶為開環質粒,dna雙鏈的其中一根斷開,導致超螺旋能量被釋放而使質粒變成鬆弛的環狀結構,結構臃腫,跑得最慢。

3、由於摩擦阻力的問題,瓊脂就像有孔海綿分子篩,細菌質粒提取中電泳會出現三條帶,最快的是超螺旋帶,它是完整的,因為它的構型緊密,跑得快。

4、 第二條帶在中間,是線性帶,即環狀雙鏈dna 兩條鏈均斷開,其分子構象變為線性,不如超螺旋緊密,跑得就慢一點。最慢的是開環帶,即環狀雙鏈dna 有一條鏈斷開,拖著一條尾巴,顯得很臃腫,所以跑得最慢。

二、引數理解:

1、蛋白質和核酸會根據ph不同帶有不同電荷,在電場中受力大小不同,因此跑的速度不同,根據這個原理可將其分開。電泳緩衝液的ph在6~9之間,離子強度0.02~0.05為最適。

2、常用1%的瓊脂糖作為電泳支援物。瓊脂糖凝膠約可區分相差100bp的dn**段,其解析度雖比聚丙烯醯胺凝膠低。

3、但它製備容易,分離範圍廣。普通瓊脂糖凝膠分離dna的範圍為0.2-20kb,利用脈衝電泳,可分離高達10^7bp的dn**段。

2樓:河傳楊穎

線性dna的電泳遷移速率比開環質粒dna快。

蛋白質和核酸會根據ph不同帶有不同電荷,在電場中受力大小不同,因此跑的速度不同,根據這個原理可將其分開。電泳緩衝液的ph在6~9之間,離子強度0.02~0.05為最適。

常用1%的瓊脂糖作為電泳支援物。瓊脂糖凝膠約可區分相差100bp的dn**段,其解析度雖比聚丙烯醯胺凝膠低,但它製備容易,分離範圍廣。普通瓊脂糖凝膠分離dna的範圍為0.

2-20kb,利用脈衝電泳,可分離高達10^7bp的dn**段。

凝膠濃度

對於瓊脂糖凝膠電泳,濃度通常在0.5~2%之間,低濃度的用來進行大片段核酸的電泳,高濃度的用來進行小片段分析。低濃度膠易碎,小心操作和使用***的瓊脂糖是解決辦法。

注意高濃度的膠可能使分子大小相近的dna帶不易分辨,造成條帶缺失現象。

緩衝液常用的緩衝液有tae和tbe,而tbe比tae有著更好的緩衝能力。電泳時使用新制的緩衝液可以明顯提高電泳效果。注意電泳緩衝液多次使用後,離子強度降低,ph值上升,緩衝效能下降,可能使dna電泳產生條帶模糊和不規則的dna帶遷移的現象。

3樓:匿名使用者

線性dna的電泳遷移速率比開環質粒dna快。

瓊脂糖凝膠電泳dna 遷移速率與分子大小和構象相關,分子構象越大,摩擦阻力越大,第一條帶是超螺旋帶應該最亮,因為超螺旋結構完整緊密,跑得最快。第二條帶為線性質粒是雙鏈都斷開變成鬆弛的線性dna,不如超螺旋緊密,跑得相對慢 。第三條帶為開環質粒,dna雙鏈的其中一根斷開,導致超螺旋能量被釋放而使質粒變成鬆弛的環狀結構,結構臃腫,跑得最慢。

4樓:樂正友安俟源

我碩士專業是分子生物學這方面的,我可以很負責地告訴你,質粒dna分子具有三種構型:共價閉合環開dna(cccdna,sc構型)、開環dna(oc構型)和線性分子(l構型).在細菌體內,質粒dna是以負超螺旋構型存在的.

在瓊脂糖凝膠電泳中不同構型的的同一種質粒dna,儘管分子量相同,但具有不同的電泳遷移率.其中跑在最前沿的是共價閉合dna,其後依次是線性dna和開環dna,其原因是共價閉合的dna其空間位阻最小,所以跑得最快.而開環dna空間位阻最大,所以跑得最慢.

這些結論都是經得起實驗考驗的,我在做質粒的上有沒有這個酶切位點鑑定的時候,我就會用原質粒和經過單酶切的質粒在同一塊膠上進行電泳,看單酶切後的質粒是不是比原質粒跑得快從而鑑定出質粒有沒有被切開.這個也分子生物學領域應用很廣泛,pcr-rflp方法就是基於這個原理進行限制性內切酶圖譜方面的鑑定的.

為什麼線性化質粒跑的快?

5樓:匿名使用者

一般是超螺旋跑的最快

然後是開環和線性

這個結果是在eb染色的情況下

不知道你切出來的條帶的大小是多少

可能是你質粒上有兩個酶切位點

或者你用cybergreen混在上樣的loading中會使得電泳速度改變

6樓:匿名使用者

不會是因為你載體上有兩處切口吧?

7樓:匿名使用者

細菌質粒提取中電泳會抄有三條帶,最快的是超螺旋帶,它是完整的,因為它的構型緊密,跑得快。

第二條帶在中間,是線性帶,即環狀雙鏈dna 兩條鏈軍斷開了,其分子構象變化,不如超螺旋緊密,跑得就慢一點

最慢的是開環帶,即環狀雙鏈dna 有一條鏈斷開,拖著一條尾巴,顯得很臃腫,所以跑得最慢

瓊脂糖凝膠電泳dna 遷移速率 與分子大小和構象相關跑得好的話 第一條超螺旋帶應該最亮

8樓:福獻仉河

1.一般情況是超來螺旋跑得最快、源半開環質粒次之、線性最慢,但也有例外。2.

pet28a/hind

iii、pet28b/hind

iii在電泳圖上處於同一水平線,pet28a和pet28b應該是相同分子量;pet28a比

pet28a/hind

iii慢,應是所說的例外情況,可能與構象有關;pet28a/hindiii與pet28a、pet28b/hindiii與pet28b不在同一位置,說明單酶切已切開。

3.線性化質粒毫無疑問是可以用的;至於pet28a只是物理性質發生改變,化學性質並未發生變化,也是可用的;

9樓:匿名使用者

你怎麼知道的線狀的跑得快的?

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