1樓：匿名使用者
可以分享一下 deofecteu transfection reagent轉染質粒細胞
a. 細胞接種:
1. 轉染前24小時左右對細胞進行轉接，接種密度約為每孔0.3~1×105個細胞；
2. 過夜培養。
b. deofecteu /dna複合物包裝(該步完成後應立即轉染):
1. 在1.5 ml無菌離心管中加入50µl無血清培養基，並新增適量的轉染試劑(2~5µl/µg dna，參見下表) 。用移液器輕輕混勻後在室溫靜置5~10分鐘。
2. 在1.5 ml無菌離心管中加入50µl無血清培養基，並新增適量的dna (0.8~1µgdna/孔， 參見附表)。用移液器輕輕混勻後在室溫靜置5~10分鐘。
3. 將deofecteu-培養基混合物滴加至dna-培養基混合物中，用移液器輕輕混勻後在室溫靜置15~20分鐘後，立即轉染。注意：
deofecteu-培養基混合物和dna-培養基混合物的混合次序非常重要，切勿顛倒。
如何讓一個細胞過度表達某種基因，來觀察此基因的作用，瞬時轉染和穩定轉染都用什麼方法
2樓：百替生物
瞬轉的方法有多種：磷酸鈣轉染法，pei轉染法，lipofectamine2000試劑盒轉染。**遞增。
一般容易轉染的細胞用前兩種方法。而比較難轉染的腫瘤細胞等則用lipo2000轉染。但用pei和lipo對細胞產生的毒性比用磷酸鈣法大。
穩轉一般都通過抗性篩選，前面已經回答過了，就不贅述了。
這些轉染都是使細胞通過多個質粒。
過表達一般通過western blot來檢測。過表達後蛋白表達量比原始細胞有顯著升高則說明過表達成功。
百替生物為您提供整體科研技術服務。
把重組質粒培養為細胞叫什麼方法
3樓：匿名使用者
要把重組質粒匯入土壤農桿菌,首先必須用ca2+處理土壤農桿菌,使土壤農桿菌轉變為感受態；然後將將重組質粒和感受態細胞在緩衝液中混合培養完成轉化過程.其實就是製備感受態的問題,和其它的細菌製備感受態是一樣的.
質粒是什麼?
4樓：靠名真tm難起
質粒（plasmid）是細菌、酵母菌和放線菌等生物中染色體（或擬核）以外的dna分子，存在於細胞質中，具有自主複製能力，使其在子代細胞中也能保持恆定的拷貝數，並表達所攜帶的遺傳資訊，是閉合環狀的雙鏈dna分子。
質粒不是細菌生長繁殖所必需的物質，可自行丟失或人工處理而消除，如高溫、紫外線等。質粒攜帶的遺傳資訊能賦予宿主菌某些生物學形狀，有利於細菌在特定的環境條件下生存。
質粒(plasmid) 廣泛存在於生物界，從細菌、放線菌、絲狀真菌、大型真菌、酵母到植物，甚至人類機體中都含有。從分子組成看，有dna 質粒，也有rna 質粒; 從分子構型看，有線型質粒、也有環狀質粒: 其表型也多種多樣。
細菌質粒是基因工程中最常用的載體。
5樓：匿名使用者
質粒(plasmid)
質粒是真核細胞細胞核外或原核生物擬核區外能夠進行自主複製的遺傳單位，包括真核生物的細胞器（主要指線粒體和葉綠體）中和細菌細胞擬核區以外的環狀脫氧核糖核酸(dna)分子。現在習慣上用來專指細菌(大腸桿菌）、酵母菌和放線菌等生物中細胞核或擬核中的dna以外的dna分子。在基因工程中質粒常被用做基因的載體(vector)。
許多細菌除了擬核中的dna外，還有大量很小的環狀dna分子，這就是質粒(plasmid)（補充：部分質粒為rna）。質粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四環素抗性基因或卡那黴素抗性基因等。
有些質粒稱為附加體(episome)，這類質粒能夠整合進細菌的染色體，也能從整合位置上切離下來成為遊離於染色體外的dna分子。
目前，已發現有質粒的細菌有幾百種，已知的絕大多數的細菌質粒都是閉合環狀dna分子(簡稱cccdna)。細菌質粒的相對分子質量一般較小，約為細菌染色體的0.5%～3%。
根據相對分子質量的大小，大致上可以把質粒分成大小兩類：較大一類的相對分子質量是40×106以上，較小一類的相對分子質量是10×106以下(少數質粒的相對分子質量介於兩者之間)。每個細胞中的質粒數主要決定於質粒本身的複製特性。
按照複製性質，可以把質粒分為兩類：一類是嚴緊型質粒，當細胞染色體複製一次時，質粒也複製一次，每個細胞內只有1～2個質粒；另一類是鬆弛型質粒，當染色體複製停止後仍然能繼續複製，每一個細胞內一般有20個左右質粒。這些質粒的複製是在寄主細胞的鬆弛控制之下的，每個細胞中含有10-200份拷貝，如果用一定的藥物處理抑制寄主蛋白質的合成還會使質粒拷貝數增至幾千份。
如較早的質粒pbr322即屬於鬆弛型質粒，要經過氯黴素處理才能達到更高拷貝數。一般分子量較大的質粒屬嚴緊型。分子量較小的質粒屬鬆弛型。
質粒的複製有時和它們的宿主細胞有關，某些質粒在大腸桿菌內的複製屬嚴緊型，而在變形桿菌內則屬鬆弛型。
在基因工程中，常用人工構建的質粒作為載體。人工構建的質粒可以集多種有用的特徵於一體，如含多種單一酶切位點、抗生素耐藥性等。常用的人工質粒運載體有pbr322、psc101。
pbr322含有抗四環素基因(tcr)和抗氨苄青黴素基因(apr)，並含有5種內切酶的單一切點。如果將dn**段插入ecori切點，不會影響兩個抗生素基因的表達。但是如果將dn**段插入到hind iii、bam h i 或 sal i切點，就會使抗四環素基因失活。
這時，含有dna插入片段的pbr322將使宿主細菌抗氨苄青黴素，但對四環素敏感。沒有dna插入片段的pbr322會使宿主細菌既抗氨苄青黴素又抗四環素，而沒有pbr322質粒的細菌將對氨苄青黴素和四環素都敏感。psc101與pbr322相似，只是沒有抗氨苄青黴素基因和psti切點。
質粒運載體的最大插入片段約為10 kb(kb表示為千鹼基對)。
6樓：匿名使用者
質粒存在於許多細菌以及酵母菌等生物中，是細胞染色體外能夠自主複製的很小的環狀dna分子。
7樓：符愫棟書慧
基因工程中，可以用在載體，將目的基因匯入到細胞內。
8樓：暴莉赧幻楓
（1）抗蟲棉基因是基因範疇，而且基因是片段來的不可以直接進入宿主細胞（容易降解）即需要把抗蟲棉的基因先連線到質粒載體上（或病毒載體），保證基因的穩定性，進入宿主細胞後仍然可以完好存在
（2）質粒載體上帶有複製啟動子和轉錄啟動子可保證，連線到載體上的抗蟲棉基因可以正常複製和表達
（3）連線到抗蟲棉基因的載體，看不見摸不著，你怎麼能確定基因連線入載體呢？即使你確定了連線如載體，載體在進入宿主細胞後是否可以表達呢？這兩個問題，最好的解決辦法是在連線抗蟲棉基因進入載體時候，同時連線一個標記基因，方便觀察你構建好的載體是不是正確的，是不是能夠表達，表達是不是穩定（4）得到可以穩定表達的細胞了，然後植物培養得到抗蟲棉，再去用棉鈴蟲感染抗蟲棉，如果觀察到死亡，說明你抗蟲棉基因不僅表達了，而且有功能，否則蛋白沒有功能
因此，從以上幾個不走來看，棉鈴蟲的作用和標記基因沒有直接關係如果還不清楚，先去搞清楚轉基因植物是怎麼得到的
9樓：我是達浪啊
質粒(plasmid) 廣泛存在於生物界，從細菌、放線菌、絲狀真菌、大型真菌、酵母到植物，甚至人類機體中都含有。從分子組成看，有dna 質粒，也有rna 質粒; 從分子構型看，有線型質粒、也有環狀質粒: 其表型也多種多樣。
細菌質粒是基因工程中最常用的載體。
10樓：匿名使用者
質粒具有自主複製能力，使其在子代細胞中也能保持恆定的拷貝數，並表達所攜帶的遺傳資訊。細菌質粒是dna重組技術中常用的載體。載體是指把一個有用的外源基因通過基因工程手段，送進受體細胞中去進行增殖和表達的工具。
我們實驗室用rfect-dna方法轉染過家兔軟骨細胞
基因工程匯入受體細胞的方法中質粒dna轉化、染色體dna轉化、一般的轉導、特殊的轉導有什麼區別？
11樓：匿名使用者
這個……有些概念我也不是特別清楚。
1、2自然沒有什麼太大問題。
3的話，染色體dna轉化最終應該是導致重組，有很大的隨機性，而且重組的可能性要取決於異源基因的同源性，所以不確定能否穩定存在。
4、5的道理也是一樣的，特殊的轉導，簡單的說就是特異性的把一段基因轉導，也就是說只要你想設計轉導一段基因，就一定可以完成，而一般轉導就不一定。
魚的方法和正確步驟是什麼？釣魚的步驟與方法
1 將魚收拾乾淨後，用刀將魚脊骨從腹內斬斷，可以防止魚蒸熟後，由於魚骨收縮而使魚變形，在魚體兩側抹勻豬油，再沾少許白酒。2 將少許肉粒拌入一點醬油 麻油 鹽 薑末 香菇末後放入魚腹中，既可使魚的味道更鮮，又可使蒸出的魚顯得飽滿。3 取大塊老薑和大蔥中段，切成長短均勻的細長絲，鋪在魚盤上，將魚入盤後再...
貼膜的步驟和方法是什麼，汽車貼膜方法與步驟
1 清潔汽車玻璃。這是汽車貼膜首要的也是最重要的步驟，玻璃清潔與否直接影響後續貼膜工作。因此需要先用具有清潔作用但不包括化學物質的水清洗玻璃以及玻璃邊緣，反覆清洗以確保清洗乾淨。隨後用刮幹板按照從乾的一面刮向溼的一面 從上到下的順序刮幹玻璃，用布擦乾邊緣。2 裁剪車膜。按照玻璃的實際尺寸裁剪車膜。事...
汽車貼膜的步驟是什麼，汽車貼膜的方法與步驟是什麼？
你好，貼膜步驟 1 在貼膜之前，首先要確保工作環境是否達到乾燥 灰塵少這些要求，否則在工作時灰塵雜物進入，將會影響貼膜效果。貼膜前建議先洗好車。2 對車輛的必要位置進行遮蓋，內部和外部都要用保護套保護起來，如果沒有專用材料，也可以選擇保鮮膜。3 對需要貼膜的汽車玻璃進行清洗乾淨，需要注意的是玻璃頂部...