PCR老P不出來是什麼原因,解決辦法是什麼

時間 2021-08-30 10:57:59

1樓:淘歌

799f-1492r是16srdna基因通用引物吧。

陰性對照能p出來,及有可能是pcr汙染了,實驗室的細菌很多,能用799f-1492r引物p出來很正常,你重複陰性實驗,看所有試劑是否被汙染(水、buffer、酶都可能汙染,甚至是引物稀釋液)。後邊還要用,汙染的話就掉大了。

沒汙染,建議你再重複試驗,設陰性對照的同時設陽性對照(用細菌做模板),如果陽性p出,陰性沒p出,就說明你的實驗本身和引物是沒問題的(不要太輕易相信引物公司,誰知道引物是不是錯了或缺了)。再看你的實驗組能否p出來,如果你對自己提的模板有足夠信心,那就說明是陰性結果(可能性不大,據說799f-1492r至少能p出線粒體16srdna基因吧),如果你對所提模板沒有100%信心,我覺得,你還是要再檢查下模板提取過程。

不知你是否是針對內生菌還是線粒體,你的dna提取過程是否會損傷或去除這些dna?

2樓:

1.檢測試驗用水是否符合標準,不符合標準的水,可能含有pcr抑制劑,當然會影響pcr效率

2.陰性對照有條帶,可能存在試劑汙染;樣本p不出來,可能是dna質量有問題,也有可能是引物特異性有問題

3.設計的反應體系和反應條件是否優化好,也是pcr一個關鍵因素當然,上述的前提是你在實驗中沒有出現試劑加錯或漏加的情況,希望對你能有幫助!

3樓:匿名使用者

建議你到專業的生物論壇上去逛逛。在這裡問些生物習題之類的還可以,這種專業性的問題估計沒有個準頭。

比如小木蟲、生命科學論壇等等,裡面有的是高手,而且各種問題和答案都有的。

個人建議,僅供參考。

4樓:

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