各位高手,我的PCR條帶彌散,陰性對照也彌散,但是不加引物不彌散,當然也沒有條帶,請問都是什麼原因啊

時間 2021-08-30 10:57:59

1樓:

陰性對照的作用就是來判斷實驗是否有汙染的,如果pcr條帶和陰性對照都彌散的話,原因應該是汙染。汙染一般有試劑的汙染,也有可能是環境的汙染。

先說試劑的汙染。你設定的陰性對照所用的每一種試劑都存在被汙染的可能,最實際也最麻煩的方法就是,每次更換一種試劑,重複實驗,從而確定那種試劑發生汙染。你提到的不加引物不彌散,那是必然的結果,及時所有試劑都發生了汙染,不加入引物,擴增也是沒辦法進行的,結果也不會有條帶。

再說環境的汙染。環境的汙染一般就是指氣溶膠的汙染,pcr實驗室多少都會存在這種問題,氣溶膠是比較難以消除的。先假設你所用的試劑都是正常的,你可以選擇兩到三對pcr產物片段較長的引物做試驗(比你此次出問題的實驗所選的要長),進行正常pcr,電泳看結果是如何,如果不出現彌散現象,可初步判斷為氣溶膠汙染。

接著選兩到三對產物片段較短的做實驗(同上),觀察結果,如果同樣出現彌散現象,此時可斷定確實是氣溶膠汙染。

以上所說,屬於理想狀態,首先要排除個人操作失誤,另外具體的情況再具體分析!

個人理解,希望對你有幫助!

2樓:mr_丁小壞

是跑出的條帶很糊麼?如果是的話,按照你說的陰性對照也彌散應該是引物的問題,也有可能是pcr試劑的問題,還有可能是退火溫度的問題。逐個排除吧。

3樓:匿名使用者

引物有無汙染,跑個電泳看看

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