PCR加樣有什麼需要注意的

時間 2021-09-13 15:48:47

1樓:

實驗操作注意事項 儘管擴增序列的殘留汙染大部分是假陽性反應的原因,樣品間的交叉汙染也是原因之一。因此,不僅要在進行擴增反應是謹慎認真,在樣品的收集、抽提和擴增的所有環節都應該注意:

1. 戴一次性手套,若不小心濺上反應液,立即更換手套;

2. 使用一次性吸頭,嚴禁與pcr產物分析室的吸頭混用,吸頭不要長時間暴露於空氣中,避免氣溶膠的汙染;

3. 避免反應液飛濺,開啟反應管時為避免此種情況,開蓋前稍離心收集液體於管底。若不小心濺到手套或桌面上,應立刻更換手套並用稀酸擦拭桌面;

4. 操作多份樣品時,製備反應混合液,先將dntp、緩衝液、引物和酶混合好,然後分裝,這樣即可以減少操作,避免汙染,又可以增加反應的精確度;

5. 最後加入反應模板,加入後蓋緊反應管;

6. 操作時設立陰陽性對照和空白對照,即可驗證pcr反應的可靠性,又可以協助判斷擴增系統的可信性;

7. 儘可能用可替換或可高壓處理的加樣器,由於加樣器最容易受產物氣溶膠或標本dna的汙染,最好使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒有這種特殊的加樣器,至少pcr操作過程中加樣器應該專用,不能交叉使用,尤其是pcr產物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區;

8. 重複實驗,驗證結果,慎下結論。

2樓:飛雪之靈

注意要在冰上進行。要換槍頭。最好在潔淨工作臺上操作。試劑使用後及時放回冰箱內,加樣後試劑蓋要擰緊,不能長時間敞開。

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