western blot內參和marker的區別

時間 2022-04-17 22:00:14

1樓:費修星建元

看到你的目的蛋白條帶在30和35kd之間,就可以初步斷定是你的目的蛋白。2.

內參呢,內參也叫看家基因,在組織或細胞中都會表達,且表達量在不同組織或細胞中幾乎是相同的,一般有β-actin,gapdh等。其作用有二,1.

是看提取蛋白質量的好壞。如果做western的時候,內參照蛋白有條帶,而目的蛋白沒有,說明蛋白的提取和轉膜等步驟沒有問題,是目的蛋白的抗體質量不好或者是稀釋倍數不對。2.

是比較客觀的說明目的蛋白的表達情況,消除上樣量等的誤差。不同的標本之間由於蛋白提取的量有差別,可能強陽性的表達跑出來的帶很弱。因此設立內參照,比較不同標本之間的表達情況。3.

最好測一下蛋白濃度再上樣,這樣好點。當然也看你的實驗室是定性還是定量了,定性的話,我覺得可以不用測濃度;要是準備定量,還是儘量保證上樣量一致吧。

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