厭氧微生物菌種的保藏方法,保藏菌種的方法有哪些?

時間 2022-11-02 09:20:18

1樓:匿名使用者

傳代儲存法:有些微生物當遇到冷凍或乾燥等處理時,會很快死亡,因此在這種情況下,只能求助於傳代培養儲存法。傳代培養就是要定期地進行菌種轉接、培養後再儲存,它是最基本的微生物儲存法,例如酸奶等常用生產菌種的儲存。

傳代儲存時,培養基的濃度不宜過高,營養成分不宜過於豐富,尤其是碳水化合物的濃度應在可能的範圍內儘量降低。培養溫度通常以稍低於最適生長溫度為好。若為產酸菌種,則應在培養基中新增少量碳酸鈣。

一般地,大多數菌種的保藏溫度以5℃為好,像厭氧菌、霍亂弧菌及部分病原真菌等微生物菌種則可以使用37℃進行儲存,而蕈類等大型食用菌的菌種則可以室溫直接儲存。

傳代培養儲存法雖然簡便,但其缺點也很明顯,如:①菌種管棉塞經常容易發黴;②菌株的遺傳性狀容易發生變異;③反覆傳代時,菌株的病原性、形成生理活性物質的能力以及形成孢子的能力等均有降低;④需要定期轉種,工作量大;⑤雜菌的汙染機會較多。

詳細情況

2樓:匿名使用者

厭氧是在封閉條件下,將汙水或廢水中的有機物,轉化為ch4、co2、h2o、nh3、h2s,併為細胞合成提供能量,少量有機物被轉化、合成新的原生質。但是採用厭氧處理汙水,極易受到鹼度、溶解氧、揮發性脂肪酸(vfa)、氧化還原電位、有毒物質、溫度、有機負荷、水力停留時間等對微生物生長繁殖的影響和抑制,設計人員往往採取加大厭氧池,增加汙水或廢水在池中的停留時間,來解決厭氧微生物生長繁殖不及造成數量不足等技術問題。

加大厭氧池給不但增加了佔地面積和工程投資,而且無法解決春夏秋冬季節變化所引起的溫差,影響厭氧微生物生存繁殖,進而造成汙水處理效果不好,引發城市、醫院、工業等汙水處理升級改造,有的還升了又升,改了又改。

厭氧微生物發生器能在24小時內產生72代高密度的厭氧微生物菌群,這些高密度的厭氧微生物群能迅速將汙水中的汙染物分解成ch4和co2,從而減少厭氧池體積、降低厭氧池投資,是理想的厭氧生物強化處理裝置。

採用厭氧池+厭氧微生物發生器,對汙水進行生物強化處理,在消化汙染物的同時,脫除汙水中的氮、去除汙水中磷、消除汙水中的味、吃掉汙水中的淤泥。厭氧微生物發生器主要應用行業如下:

1、醫院、療養院、醫院院校、農村衛生院、醫療診所等含菌汙水處理;

2、城鎮、村鎮、農村、住宅小區及開發區生活汙水處理,賓館、飯店、學校、商場及辦公樓汙水處理,車站、航空港、碼頭等汙水處理;

3、化工、製藥、印染、醃製、畜禽養殖、製糖、釀酒、石化、焦化、農藥、味精、紙漿、毛紡、橡膠、餐飲廢水處理;

4、城鎮汙水處理廠升級改造及中水回用處理;

5、有脫氮除磷需求的廢水處理;

6、江河、湖泊等河道、景觀治理;

7、溼地公園生態修復;

8、汙水處理廠汙泥減量,實現無泥外排處理。

3樓:匿名使用者

乾燥恆溫的環境裡保藏,一般一年不會失活。

保藏菌種的方法有哪些?

4樓:匿名使用者

1、傳代培養

保藏法:包括又有斜面培養、穿刺培養、皰肉培養基培養等,培養後於4-6℃冰箱內儲存。

2、液體石蠟覆蓋保藏法:液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養的變相方法,能夠適當延長保藏時間。

3、載體保藏法:載體保藏法是將微生物吸附在適當的載體,如土壤、沙子、矽膠、濾紙上,而後進行乾燥的保藏法。

4、寄主保藏法:寄主保藏法用於目前尚不能在人工培養基上生長的微生物。

5、冷凍乾燥保藏法:先使微生物在極低溫度(-70℃左右)下快速冷凍,然後在減壓下利用昇華現象除去水分(真空乾燥),其中真空冷凍乾燥法最常見。

菌種保藏的原理:

菌種保藏有多種方法,其原理大多大同小異,主要是運用一些方式儘量降低生物體內的代謝,達到延長生命,減少變異的目的。通常採用的方法為低溫、缺氧、乾燥。

低溫主要對菌種產生兩方面的影響,首先,較低的溫度可以減緩機體細胞的酶活,降低新陳代謝,達到保藏菌種的目的。其次,低溫同時會導致菌體誘發菌絲自溶機制,如果降溫過程失誤,同樣會造成機體的機械損傷和溶質損傷。

5樓:中國農業出版社

(1)斜面低溫保藏 常用的方法是採用pda培養基試管,在1~4℃的穩定低溫容器中保藏,每3~4個月繁殖一次;也有采用同樣的低溫條件,但培養基是木屑麥皮培養基,一年更換一次。

(2)液氮保藏 在從-196℃的溫度下取出或進入-196℃溫度保藏的過程中,嚴格按照液氮保藏的有關條件和程式處理受保藏或將取出使用的香菇菌株,防止在保藏或取出的處理過程中使菌株受傷害。

保藏菌種的方法?

6樓:中國農業出版社

將需要保藏的菌種,接種在適宜的斜面培養基上,菌絲長滿斜面時,用硫酸紙包紮棉塞或者用無菌矽膠塞代替棉塞,置4℃的冰箱中保藏,叫做斜面(菌種)低溫保藏法。由於微生物的新陳代謝活動未停止,試管內培養基易失水變幹。因此,低溫保藏法的保藏時間較短,不適於長期保藏。

每隔3~6個月應轉管一次。

7樓:匿名使用者

1.斜面低溫保藏法 2.液氮超低溫保藏法 3.砂土管保藏法 4.石蠟油封藏法 5.冷凍真空乾燥保藏法 6.宿主保藏法 7.麩皮保藏法

微生物菌種保藏的方法有哪些?

8樓:中國農業出版社

菌種的優劣是食用菌生產成敗的關鍵。菌種是國家重要的生物資源,也是微生物工廠首要的生產資料。由於微生物繁殖快、易變異,因此微生物菌種特別需要妥善保藏。

世界各國對微生物菌種都很重視。中國科學院微生物研究所專門設立了菌種的保藏機構,為各生產單位收藏和**各種優良菌種。當然就具體的生產單位而言,大量的生產用菌種還得靠自己來生產和保藏。

菌種保藏的目的:是使優良菌種經過較長時間後,仍能保持菌種的優良性狀、生活能力及純度,降低菌種的衰亡速度,確保菌種的純一,防止雜菌汙染及絕種。

保藏菌種的方法:人們在長期的生產實踐中,積累了不少保藏菌種的經驗,常用的保藏方法有:斜面低溫保藏法、液體石蠟保藏法、砂土管保藏法、濾紙片保藏法、穀粒保藏法等。

常用保藏菌種的方法有以下幾種:

(1)斜面低溫保藏法這是最簡單最普通的保藏方法。首先將菌種在適宜的斜面培養基(一般pda)上培養成熟後,選擇菌絲生長粗壯,邊緣儲存。一般儲存溫度4~6℃,除草菇和銀耳菌種外(10~15℃),此方法對其他食用菌都適宜,一般菌種可保藏2~4個月,所以需定時移接。

此法保藏雖然方便,但是保藏時間短,需經常轉管,也很容易發生衰退變異現象。因此,不能用作長期保藏,最好與其他方法結合起來保藏。

另外,為了減少保藏期間培養基水分蒸發,瓊脂最好加到2.5%。為防止菌種在保藏過程中產酸分的積累,應加入0.

2%的磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀等緩衝鹽類,同時,培養成熟後,最好將棉塞管口外剪平,並用礦蠟封或換以無菌木塞,這樣做也可以減少培養基水分的散失,延長儲存時間。

在農村如果沒有冰箱,可採用土法保藏。即把保藏用的斜面菌種換上無菌橡皮塞,並用礦燭蠟封後密閉的廣口瓶中,懸入井底保藏。(2)貯藏室保藏法原種和栽培種一般只在貯藏室短期保藏,貯藏室溫度0~10℃為好。

室內應清潔、乾燥、無光,應經常檢查溫度和溼度,以降低其生活力,減少變異退化,防止雜菌汙染,避免過早出菇。溫度越高,儲存的時間越短。

9樓:x小海

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1、低溫定期移植保藏法。將需要保藏的菌種接種在適宜的斜面培養基上,適溫培養,當菌絲健壯地長滿斜面時取出,放在3-5℃低溫乾燥處或4℃冰箱、冰櫃中保藏,每隔4-6個月時間移植轉管一次,具體應根據菌種特性決定。保藏時要注意環境溫度不能太高,以防黴菌通過棉塞進入管內。

因此,若用棉塞,可用乾淨的硫酸紙或牛皮紙包紮棉塞,即可減少汙染的機會,也可防止培養基幹燥。除草菇菌種外,其他食用菌菌種都能採用此法保藏。

2、液體石蠟保藏法。取化學純液體石蠟(要求不含水分、不黴變)裝於三角瓶中加棉塞幷包紙,在1公斤/平方釐米壓力下滅菌1小時,再放入40℃恆溫箱中數天,以蒸發其中水分,至石蠟油完全透明為止。將處理好的石蠟油移接在空白斜面上,28-30℃下培養2-3天,證明無雜菌生長方可使用。

然後用無菌操作的方法把液體石蠟注入待保藏的斜面試管中。注入量以高出培養基斜面1-1.5釐米,塞上橡皮塞,用固體石蠟封口,直立於低溫乾燥處保藏。

保藏時間在一年以上,在低溫下,保藏時間還可延長。

3、沙土管保藏法。取河沙用水浸泡洗滌數次,過60目篩除去粗粒,再用10%鹽酸浸泡2-4小時,除去其中有機物質,再用水沖洗至流水的ph達到中性,烘乾備用。同時取貧脊土或菜園土用水浸泡,使呈中性,沉澱後棄去上清液,烘乾碾細,用100目篩子過篩,將處理好的沙與土以(2-4):

1混勻,用磁鐵吸出其中的鐵質,然後分裝小試管或安瓿內,每管裝量0.5-2克,塞棉塞,用紙包紮滅菌(1.5公斤/平方釐米,1小時),再幹熱滅菌(160℃,2-3小時)1-2次,進行無菌檢驗,合格後使用。

將已形成孢子的斜面菌種,在無菌條件下注入無菌水3-5毫升,刮菌苔,製成菌懸液,再用無菌吸管吸取菌液滴入砂土管中,以浸透砂土為止。將接種後的沙土管放入盛有乾燥劑的真空乾燥器內,接上真空泵抽氣數小時,至沙土乾燥為止。真空乾燥操作需在孢子接入後48小時內完成,以免孢子發芽。

製備好的沙土管用石蠟封口,在低溫下可保藏2-10年。

4、濾紙片保藏法。取白色(收集深色孢子)或黑色(收集白色孢子)濾紙,剪成4×0.8釐米的小紙條,平鋪在培養皿中用紙包裹進行滅菌(1公斤/平方釐米,30分鐘)。

採用鉤懸法收集孢子,讓孢子落在濾紙條上。將載有孢子的濾紙條放入保藏試管中,再將保藏試管放入乾燥器中1-2天,除去濾紙水分,使濾紙水分含量達2%左右,然後低溫保藏。

5、自然基質保藏法

⑴麥粒保藏法:取無癟粒、無雜質的小麥淘洗乾淨,浸泡12-15小時,加水煮沸15分鐘,繼續熱浸15分鐘,使麥粒脹而不破,瀝乾水分攤開晾晒,使麥粒的含水量在25%左右。將碳酸鈣、石膏拌入熟麥粒中(麥粒、碳酸鈣、石膏比例為10公斤:

133克:33克),拌和均勻後裝入試管中,每管約2-3克,然後清洗試管,塞棉塞,滅菌1.5(1.

5公斤/平方釐米,2小時),經無菌檢查合格後備用,試管基質冷卻後接種,適溫培養,待菌絲長滿基質後用石蠟塗封棉塞,放低溫保藏。2年左右轉接一次。

⑵麩曲保藏法。取新鮮麩皮,過60目篩除去粗粒。將麩皮和自來水按1:

1拌勻,裝入小試管,每管約裝1/3高度,加棉塞用紙包紮,高壓滅菌(1.5公斤/平方釐米,30分鐘),經無菌檢查合格後備用,將生長在斜面培養基上的健壯菌種,移種至無菌麩曲管中,移種時注意儘管搗勻小試管中的麩皮,呈疏鬆狀態,在適溫下培養至菌絲長滿麩皮為止,將麩曲小管置乾燥器中,在低溫或適溫下保藏。

6、生理鹽水保藏法。取純氯化鈉0.7-0.

9克,放入100%毫升蒸餾水中,攪拌均勻分裝試管,每管5-10毫升,進行滅菌(1公斤/平方釐米,30分鐘),經無菌檢查合格後備用,將待保藏的菌種接入馬鈴薯葡萄糖液體培養基中適溫振盪培養5-7天。無菌操作吸取少許培養菌種注入經檢驗合格的生理鹽水試管中,塞上無菌橡皮塞,用石蠟塗封,在室溫或低溫保藏。

7、冷凍真空乾燥法。將已培養、生長豐富的菌體或孢子懸浮於滅菌的血清、卵白、脫脂奶製成菌懸液,將懸液以無菌操作分裝於滅菌的玻璃安瓿瓶中,每管約0.3-0.

5毫升,然後用耐壓橡皮管與冷凍乾燥裝置連線,安瓿瓶放在冷凍槽中於-30℃至-40℃迅速冷凍,並在冷凍狀態下抽空乾燥,並在真空狀態下熔封安瓿,在-20℃儲存,一般可儲存十年以上,但成本較高。

8、液氮超低溫保藏法。首先將要保藏的菌種製成菌懸液備用;其次,準備安瓿瓶,每瓶加入0.8毫升冷凍保護劑10%(體積比)甘油蒸餾水溶液,塞棉塞滅菌(1公斤/平方釐米,5分鐘)。

無菌檢查後,接入要保藏的菌種,火焰熔封瓶口,檢查是否漏氣,將封好口的安瓿瓶放在凍結器內,以每分鐘下降1℃的速度緩慢降溫,使保藏品逐步均勻地凍結,直至-35℃,以後凍結速度就不需控制,安瓿凍結後立即放入液氮罐內,在-150至-196℃保藏,該法只有少數科研院所使用。

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