為什麼我用CTAB法提取的DNA會出現黃綠色

時間 2022-06-29 11:35:08

1樓:麴令刑春雪

要用冰凍材料提出高質量的基因組dna,應確保以下幾點:

1.確保取樣後立即投入液氮中儲存.

2.在磨樣時一定要一直使材料處於低溫狀態。研磨前先將液氮倒入研缽,研缽徹底冷卻後,再放入材料,研磨過程中,一定不要讓液氮揮發淨使材料回溫!

否則會dna降解得很厲害。裝管的時候,材料一定要有液氮的保護才行!否則研磨時的液氮保護dna不都前功盡棄了?

可以這樣做:將幾個離心管放入一個容器,向容器中加液氮,將其冷凍一下,使之處於低溫狀態,將液氮還為揮發乾淨的材料放入管內,不要急著蓋蓋子,因為液氮不揮發乾淨就蓋上會再次彈開。將離心管放入盛有液氮的容器,等管內的液氮揮發乾淨蓋上蓋子即可。

另外,如果是在離心管上編號,最好在冷凍前寫好,否則離心管冷凍後材料會受影響不說,也很難寫上。

提取dna時加液氮的目的主要是防止dna的降解,所以必須一直提醒自己,減少材料回溫的機會,液氮保護必須自始至終。

3.在用ctab法提取時,剛投入水浴時可以稍快速的晃動,之後的晃動一定要輕柔!

4.加酚/氯仿/異戊醇靜置30min後,離心溫度不可過低。儘量保持在15度以上。

5.將dna加入異丙醇析出時用的槍頭一定要剪過的。這點很重要。過尖的槍頭會把dna鏈弄斷。

6.加入異丙醇後出現的dna絮狀物儘量要挑出,儘量不要離心,因為離心後雖然產量會增大,但是不完整的dna也增多了。

另外,看樓主的電泳圖條帶比較弱,看來不只是降解,提取量也比較少。這裡對於增加提取量想說明一點,在研磨樣品時,研得細和研得很細,提出的dna量可以相差幾倍!所以,在液氮保護的很好的情況下多研磨幾次,要比在後面的過程中離心以增加產量要划得來!

網上看到的...

2樓:

葉綠素太多了的緣故。

3樓:

沒有離心好。多離心幾次。

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