1樓：捲心黃花菜
由一條rna單鏈轉錄為互補dna(cdna)稱作「逆轉錄」，由依賴rna的敏虧dna聚合酶（逆轉錄酶）來完成。隨後，dna的另一條鏈通過脫氧核苷酸引物和依賴dna的dna聚合酶完成，隨每個迴圈倍增，即通常的pcr。原先友宴的rna模板被rna酶 h降解，留下互補dna。
這裡有個動畫，不妨看看好拿銀。
2樓：網友
可以兩步法，也可以one step
逆轉錄pcr的實驗步驟用到哪些試劑和儀器
3樓：南京金益柏生物科技****
一、實驗器具與材料：
1、移液器：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl
2、吸頭：1ml、200μl、20μl
3、勻漿管：5ml
4、吸頭臺：放置1ml吸頭的乙個，放置20μl吸頭的乙個。
5、ep管：
6、試劑瓶：2個60ml的棕色試劑瓶（廣口，帶蓋）；1個125ml的白色試劑瓶（放無水乙醇）
7、量筒：50ml、250ml、500ml
8、容量瓶：250ml、500ml、1000ml
9、試管架：5ml、
10、鹽水瓶：250ml、500ml各2個備用，乙個裝無水乙醇，另乙個裝depc水。
11、鋁製飯盒：4個。
12、塑料小飯盒：1個。
13、大瓷缸：2個。
14、錫泊紙：一卷。
15、捲紙：2卷。
16、三角燒瓶：帶蓋，稍大。
二、實驗器具的處理與準備。
1、塑料製品：（包括槍頭、ep管、勻漿管等）
先將depc水從容量瓶中倒入瓷缸中，將塑料製品逐個浸泡其中，其中小槍頭需要吸管打入depc水，過夜，然後高壓，再烤乾備用，實驗前將槍頭等放入吸頭臺，再高壓一次（ep管）
2、玻璃製品：泡酸過夜，沖洗乾淨，蒙錫紙烤乾備用（depc水泡）（洗淨後先泡1‰depc過夜，再烤乾）
3、勻漿器：（包括剪刀、鑷子）先洗淨後，再高壓（不需要泡depc）
三、試劑配製：
1、depc水：吸出1ml放在1000ml雙蒸水中配成1‰depc水，放在1000ml容量瓶中靜置4小時備用。
乙醇：用無水乙醇 depc水配，然後放-20℃儲存（其中depc水需先高壓）
3、異丙醇：放入棕色瓶中。
4、氯仿：放入棕色瓶中。
5、瓊脂糖。
4樓：匿名使用者
引物可以使用oligo(dt)18 (50μm)或random hexamers (50ng/μl)。2、模板如使用poly（a）＋rna，用量一般在10pg-500ng之間。3、biog rt mix含有優化的dntps和緩衝液，biog rtase mix 含有biog super reverse transcriptase 和rnase inhibitor 4、用於pcr反應的cdna產物體積一般不要超過pcr反應體積的1/10。
pcr配體系的時候taq酶為什麼要最後加入
5樓：網友
原因：1、相對於pcr體系中的組分，taq酶相對不穩定，所以最後加taq酶混勻後上機；
2、每個反應的taq酶使用量較小，一般先加多的成分，比如buffer、水等；
6樓：網友
樓上第一點：不贊同，pcr的酶是比較穩定的，過去的酶，沒有熱啟動功能，先加會導致非特異擴增或更多引物二聚體，後加是儘量保證擴增的是目的片段和更少的二聚體，現在的基本都有熱啟動功能所以無所謂了。
第二點：認同，其他常用的解釋是便宜的加錯無所謂。
pcr逆轉錄時加rna時間長了有影響嗎
7樓：混氣機
在pcr逆轉錄過程中加rna的時間長短會對整個pcr反應的結果產生影響。通常來說，加rna的時間不能過短，否則可能會導致rna不完全反轉錄，導致後續pcr反應的訊號較弱。然而，加rna的時間過長也可能會造成一些問題。
一方面，過長的rna反轉錄時間可能會導致rna的分解或退化，從而影響pcr反應的訊號；另一方面，遠超過rna應反轉錄的時間也可能導致無法正常放大逗液舉pcr反應產物。因此，為了獲得最佳的pcr結果，需要根據實驗情況和試劑盒說明的建議來確定rna反轉錄的時間。此外，還應該注意rna儲存的條件山碧和反轉錄試劑的質量埋賣，以確保獲得穩定的pcr訊號。
pcr時，將rna反轉錄成cdna反應體系怎麼算
8樓：匿名使用者
再以cdna為模板進行pcr擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。rt-pcr使rna檢測的靈敏性提高了幾個數量級，使一些極為微量rna樣品分析成為可能。該技術主要用於：
分析基因的轉錄產物、獲取目的基因、合成cdna探針、構建rna高效轉錄系統。 rt- pcr即逆轉錄pcr，是將rna的逆轉錄（rt）和cdna的聚合酶鏈式擴增反應（pcr）相結合的技術。rt-pcr技術靈敏而且用途廣泛，可用於檢測細胞/組織中基因表達水平，細胞中rna病毒的含量和直接轉殖特定基因的cdna序列等。
逆轉錄pcr的pcr各步驟的目的
9樓：秒懂百科
逆轉錄pcr：聚合酶鏈式反應的一種廣泛應用的變形。
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