1樓：
實時pcr產物的tm值大小一般會在80°上下，所以溶解曲線不必從40°開始，可以從65°開始進行溶解曲線繪製，另外在產物之前出現的小峰，同時也在陰性對照中出現了，應該是引物二聚體或者是非特異的擴增。
熒光定量pcr繪製溶解曲線應該從多少度開始
2樓：du知道君
一般染料法定量pcr在進行完pcr後都要執行熔解曲線,一般設定先94度幾分鐘,然後驟冷到65度（假定65度為退夥溫度）.在65度時,pcr產物是以雙鏈的形式存在的。
因為染料是插到雙鏈dna的小溝裡然後發熒光的,所以這個時候檢測到很強的光訊號,隨著溫度升高,雙鏈逐漸開啟,熒光訊號逐漸減弱。
實時定量pcr的繪製溶解曲線應該從多少度開始升溫
3樓：匿名使用者
如果擴增產物只有目標序列的話就應該只有一個峰的。
1.簡單的說來，溶解曲線就是在採用熒光染料法進行實時定量pcr時採用的一種分析手段。當體系的溫度逐漸升高的時候，體系中的pcr產物慢慢的由雙鏈變成單鏈，這是一個逐漸變化的過程。
由於熒光染料能插入到雙鏈dna中而發光，單鏈不發光，因此可以看到熒光的變化。在實時熒光pcr儀中都應該自帶分析軟體，看溶解曲線主要是看其峰在什麼位置，不同的核酸會有不同的峰。同一核酸的峰差別應該不大，一般能控制在正負0.
5度內。
2.溶解曲線是做染料法定量pcr時，用到的一種結果分析方法。
一般染料法定量pcr在進行完pcr後都要執行熔解曲線，一般設定先94度幾分鐘，然後驟冷到65度（假定65度為退夥溫度）。在65度時，pcr產物是以雙鏈的形式存在的，因為染料是插到雙鏈dna的小溝裡然後發熒光的，所以這個時候檢測到很強的光訊號，隨著溫度升高，雙鏈逐漸開啟，熒光訊號逐漸減弱。因為理論上要檢測的樣本長度一定，所以到達某一個溫度的時候，應該全部解鏈，我們假設在88 度的時候pcr產物全部解鏈，這個時候就是我們在熔解曲線圖上看到的所有曲線同時驟然下滑的那個點，一般把最高溫設定在94度左右。
如果下滑點不在一個溫度，說明不是一種產物。
4樓：匿名使用者
一般都是50到90度
55度有小峰的話很可能就是非特異擴增出的雜帶，把pcr產物拿去電泳，如果是非特異條帶的話，適當提高退火溫度，提高2度左右，再不行就縮短退火和延伸時間
5樓：士誠小人也
一般是從65度開始，升到90度左右
6樓：滑茗緒惜兒
實時pcr產物的tm值大小一般會在80°上下，所以溶解曲線不必從40°開始，可以從65°開始進行溶解曲線繪製，另外在產物之前出現的小峰，同時也在陰性對照中出現了，應該是引物二聚體或者是非特異的擴增。
熒光定量pcr中溶解曲線的溫度大概是多少
7樓：祝您每天開心
一般染料法定量pcr在進行完pcr後都要執行熔解曲線,一般設定先94度幾分鐘,然後驟冷到65度（假定65度為退夥溫度）.在65度時,pcr產物是以雙鏈的形式存在的。
因為染料是插到雙鏈dna的小溝裡然後發熒光的,所以這個時候檢測到很強的光訊號,隨著溫度升高,雙鏈逐漸開啟,熒光訊號逐漸減弱。
8樓：匿名使用者
realtime pcr的溶解曲線的出峰溫度一般在85度——90度，溶解溫度是指核酸片段解鏈一半時的溫度。哪些因素影響熔解溫度呢？pcr產物大小，gc含量等，一般的熔解溫度是要大於80度的。
我們實驗室用bioghc -pcr檢測了dna,溶解曲線是為了驗證擴增產物特異性的
怎麼理解熒光定量pcr的溶解曲線
9樓：匿名使用者
熒光定量pcr的溶解曲線理解：用syber green方法做完pcr後，用來判斷產物是否相對專一。應結束後，逐漸加溫。和syber
green分子結合的pcr產物隨溫度升高逐漸變為單鏈，就不能在和syber
green結合。
一般每加溫一度，讀一次訊號。當溫度到達pcr產物的tm時，產物解離一下增多。曲線的橫座標是溫度，而縱座標是熒光訊號的變化，開始加熱，訊號變化不大，所以幾乎是平的。
接近tm時，突然變化加大，所以出現峰值。再升溫，產物全部解離，就又是一條直線了。如果有非特異性產物，在加熱過程中就會出現一些比較矮，寬的峰。
10樓：匿名使用者
這個一般是用syby green作為熒光染料的時候需要做的工作！
因為syby green染料是非特異的染料，只要有擴增，染料就可以鑲嵌在雙鏈中發出熒光。我們做溶解曲線是為了觀察我們擴增發出熒光的片段是不是我們需要的產物。如果溶解曲線做出來只有單峰，且出鋒位置是你的退火溫度，那麼這個是你的產物發出的熒光，實驗結果有效。
如果出現多鋒或退火溫度不對，那麼這個實驗結果是不可信的！你需要再次調整！
熒光定量pcr熔解曲線
11樓：匿名使用者
溶解曲線是在正常的pcr反應基礎上加一個溶解曲線的反應條件，其中當溫度由60℃升至95℃時，pcr儀每隔一定的溫度檢測一次訊號。最後將收集的訊號繪製出溶解曲線，然後將溶解曲線一次微分就會得到我們平時看到的峰性圖。每一條線代表著某個孔裡的反應體系裡產物的單一情況，某一條線如果為單峰且在一定合理的溫度範圍內（一般為80~90℃）則認為正常，如果為雙峰則可能有非特異性擴增。
由此可以判斷產物是否為目的基因且是否單一。內參有內參的線，目的基因有目的基因的線，同一條線不會出現兩個基因的峰。你可以看一下溶解曲線的橫、縱座標。
12樓：烏冬蛋白
內參量多，迴圈數少吧，我也不熟
熒光定量pcr三步升溫時熔解曲線從72度開始嗎
13樓：獅子龍飛
when the three step heats up, the melting curve starts at 72 degrees pcr
求助，熒光定量pcr擴增曲線和溶解曲線
14樓：抹不掉呀
實時pcr產物的tm值大小一般會在80deg;上下，所以溶解曲線不必從40deg;開始，可以從65deg;開始進行溶解曲線繪製，另外在產物之前出現的小峰，同時也在陰性對照中出現了，應該是引物二聚體或者是非特異的擴增。
15樓：真莉莉畢田
通過你的描述目前還有很多資訊不實很瞭解：目的片段長度？pcr反應條件？
管家基因的溶解曲線怎麼樣？做的什麼實驗？是否將產物跑了電泳，條帶怎麼樣？
你可以將上述問題整理一下在一些專業性較強的生物論壇發帖子讓其他大神幫你分析一下。比如丁香園、生物秀等等。
出現怪異的溶解曲線大部分都是機器設定或者反應體系的問題，建議：
1、將擴增產物跑一下電泳，看一下目的條帶亮不亮2、一般定量pcr擴增後目的片段的峰在80~90℃之間，反應條件確認一下設定是否有問題
3、適當增加模板量或者減少引物濃度。
4、用的是哪個公司的酶？問一下這個公司的技術支援
如何設計熒光定量pcr的引物及taqman探針
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實時熒光定量PCR儀國產有哪些,價格及相關技術引數
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