1樓：匿名使用者
定氮法，雙縮尿法（biuret法）、folin－酚試劑法（lowry法）和紫外吸收法。考馬斯亮藍法（bradford法）。
凱氏定氮 靈敏度低，適用於0.2~ 1.0mg氮，誤差為 ±2％ 費時
8～10小時 將蛋白氮轉化為氨，用酸吸收後滴定 非蛋白氮（可用三氯乙酸沉澱蛋白質而分離） 用於標準蛋白質含量的準確測定；干擾少；費時太長
雙縮脲法（biuret法） 靈敏度低 1～20mg 中速 20~30分鐘 多肽鍵＋鹼性cu2＋®紫色絡合物 硫酸銨；tris緩衝液；某些氨基酸 用於快速測定，但不太靈敏；不同蛋白質顯色相似
紫外吸收法 較為靈敏 50～100mg 快速 5～10分鐘 蛋白質中的酪氨酸和色氨酸殘基在280nm處的光吸收 各種嘌吟和嘧啶；
folin－酚試劑法（lowry法） 靈敏度高 ～5mg 慢速 40～60分鐘 雙縮脲反應；磷鉬酸－磷鎢酸試劑被tyr和phe還原 硫酸銨；tris緩衝液；甘氨酸；
各種硫醇 耗費時間長；操作要嚴格計時；顏色深淺隨不同蛋白質變化
考馬斯亮藍法(bradford法) 靈敏度最高 1～5mg 快速5～15分鐘 考馬斯亮藍染料與蛋白質結合時，其lmax由465nm變為595nm 強鹼性緩衝液；
sds 最好的方法；干擾物質少；顏色穩定； 顏色深淺隨不同蛋白質變化
常用的蛋白質含量測定方法有哪些
2樓：匿名使用者
①凱氏定氮法
原理：蛋白質平均含氮量為16%。當樣品與濃硫酸共熱，蛋白氮轉化為銨鹽，在強鹼性條件下將氨蒸出，用加有指示劑的硼酸吸收，最後用標準酸滴定硼酸，通過標準酸的用量即可求出蛋白質中的含氮量和蛋白質含量。
②雙縮脲法
原理：尿素在180℃下脫氨生成雙縮脲，在鹼性溶液中雙縮脲可與cu2+形成穩定的紫紅色絡合物。蛋白質中的肽鍵實際上就是醯胺鍵，故多肽、蛋白質等都有雙縮脲（biuret）反應，產生藍色或紫色複合物。
比色定蛋白質含量。
缺點：靈敏度低，樣品必須可溶，在大量糖類共存和含有脯氨酸的肽中顯色不好。其 精確度 較差 (數mg)，且會受樣品中 硫酸銨 及 tris 的干擾，但 準確度 較高，不受蛋白質的種類影響。
③folin酚法(lowry)
folin酚法是biuret 法的延伸，所用試劑由試劑甲和乙兩部分組成。試劑甲相當於雙縮脲試劑（鹼性銅試劑），試劑乙中含有磷鉬酸和磷鎢酸。
在鹼性條件下，蛋白質中的巰基和酚基等可將cu2+還原成cu+， cu+能定量地與folin－酚試劑反應生成藍色物質，600nm比色測定蛋白質含量。
靈敏度較高(約 0.1 mg)，但較麻煩，也會受 硫酸銨 及 硫醇化合物 的干擾。 步驟中各項試劑的混合，要特別注意均勻澈底，否則會有大誤差。
④紫外法
280nm光吸收法：利用tyr在280nm在吸收進行測定。
280nm-260nm的吸收差法：若樣品液中有少量核酸共存按下式計算：
蛋白質濃度(mg/ml)=1.24e280-0.74e260 （280 260為角標）
⑤色素結合法（bradford 法）
直接測定法：利用蛋白質與色素分子（coomassie brilliant blue g-250）結合物的光吸收用分光光度法進行測定。
考馬斯亮蘭（cbg）染色法測定蛋白質含量。cbg 有點像指示劑，會在不同的酸鹼度下變色；在酸性下是茶色，在中性下為藍色。當 cbg接到蛋白質上去的時候，因為蛋白質會提供 cbg一個較為中性的環境，因此會變成藍色。
當樣本中的蛋白質越多，吸到蛋白質上的cbg也多，藍色也會增強。因此，藍色的呈色強度，是與樣本中的蛋白質量成正比。
間接測定法：蛋白質與某些酸性或鹼性色素分子結合形成不溶性的鹽沉澱。用分光光度計測定未結合的色素，以每克樣品結合色素的量來表示蛋白質含量的多少。
⑥bca法
bca（bicinchoninc acid procedure，4,4』-二羧-2,2』-二喹啉）法與lowry法相似，主要差別在鹼性溶液中，蛋白質使cu2+轉變cu+後，進一步以bca 取代folin試劑與cu+結合產生深紫色，在波長562 nm有強的吸收。
它的優點在於鹼性溶液中bca 比folin試劑穩定，因此bca與鹼性銅離子溶液結合的呈色反應只需一步驟即完成。靈敏度lowry法相似。
本方法對於陰離子、非離子性及二性離子的清潔劑和尿素較具容忍度，較不受干擾，但會受還原糖 及edta的干擾。
⑦膠體金測定法
膠體金(colloidal gold)是氯金酸(chloroauric acid)的水溶膠，呈洋紅色，具有高電子密度，並能與多種生物大分子結合。
膠體金是一種帶負電荷的疏水膠體遇蛋白質轉變為藍色，顏色的改變與蛋白質有定量關係，可用於蛋白質的定量測定。
⑧其他方法
有些蛋白質含有特殊的 非蛋白質基團，如 過氧化物酶含有 亞鐵血紅素基團，可測 403 nm 波長的吸光來定量之。 含特殊金屬的酶 (如鎘)，則可追蹤該金屬。
3樓：李樹的戀愛
測定蛋白質的方法可分為兩大類：一類是利用蛋白質的共性，即含氮量、肽鍵和折射率測定蛋白質含量；另一類是利用蛋白質中特定氨基酸殘基、酸性和鹼性基團以及芳香基團等測定蛋白質含量。常見的方法有：
凱氏定氮法、雙縮脲法、酚試劑法及紫外吸收法。
1.凱氏定氮法
準備4個50ml凱氏燒瓶並標號，想1、2號燒瓶中加入定量的蛋白質樣品，另外兩個燒瓶作為對照，在每個燒瓶中加入硫酸鉀-硫酸銅混合物，再加入濃硫酸，將4個燒瓶放到消化架上進行消化，之後進行蒸餾，全部蒸餾完畢後用標準鹽酸滴定各燒瓶中收集的氨量，直至指示劑混合液由綠色變回淡紫紅色，即為滴定終點，結算出蛋白質含量。
2.雙縮脲法
雙縮脲法是第一個用比色法測定蛋白質濃度的方法，硫銨不干擾顯色， cu2+與蛋白質的肽鍵，以及酪氨酸殘基絡合，形成紫藍色絡合物，此物在540nm波長處有最大吸收。首先利用標準蛋白溶液和雙縮脲試劑繪製標準曲線，將待測血清與硫酸鈉在待測試管中混合，並用只加入硫酸鈉不含血清的試管作為對照，將兩支試管加入等量的雙縮脲試劑，充分混合後於37℃環境中放置10分鐘，在540nm波長進行比色，以對照管調零，讀取吸光度值，由標準曲線上直接查出蛋白質含量。雙縮脲法常用於0.
5g/l～10g/l含量的蛋白質溶液測定。
3.酚試劑法
取6支試管分別標號，前5支試管分別加入不同濃度的標準蛋白溶液，最後一支試管加待測蛋白質溶液，不加標準蛋白溶液，每支試管液體總量通過加入蒸餾水補足而保持一致，將液體混合均勻，在室溫下放置30分鐘，以未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照，於650nm波長處測定各管中溶液的吸光度值
4.紫外吸收法
大多數蛋白質在280nm波長處有特徵的最大吸收，這是由於蛋白質中有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸存在，可用於測定0.1～0.5mg/ml含量的蛋白質溶液。
取9支試管分別標號，前8支試管分別加入不同濃度的標準蛋白溶液，1號試管不加標準蛋白溶液，最後一支試管加待測蛋白質溶液，而不加標準蛋白溶液，每支試管液體總量通過加入蒸餾水補足而保持一致，將液體混合均勻，在280nm波長處進行比色，記錄吸光度值。
5.其他
除了以上介紹的方法之外，考馬斯亮藍法、二喹啉甲酸法等均可用於蛋白質測定。
蛋白質的測定都有哪些方法？它們的原理、方法、 操作特點、優缺點、適用範圍各是什麼？
4樓：匿名使用者
蛋白質的測定都有哪些方法？它們的原理、方法、 操作特點、優缺點、適用範圍各是什麼？
①凱氏定氮法 原理：蛋白質平均含氮量為16%。當樣品與濃硫酸共熱，蛋白氮轉化為銨鹽，在強鹼性條件下將氨蒸出，用加有指示劑的硼酸吸收，最後用標準酸滴定硼酸，通過標準酸的用量即可求出蛋白質中的含氮量和蛋白質含量。
比較分光光度法測定蛋白質含量與其他幾種常用蛋白質測定方法的優缺點？
5樓：印玲崔筠
優點：1
前者精確度高；2
前者測定時間快；
缺點：前者操作複雜。
各種蛋白互作檢測方法有哪些優缺點？
6樓：匿名使用者
定氮法，雙縮尿法（biuret法）、folin－酚試劑法（lowry法）和紫外吸收法。考馬斯亮藍法（bradford法）。
凱氏定氮靈敏度低，適用於0.2~1.0mg氮，誤差為±2％費時
8～10小時將蛋白氮轉化為氨，用酸吸收後滴定非蛋白氮（可用三氯乙酸沉澱蛋白質而分離）用於標準蛋白質含量的準確測定；干擾少；費時太長
雙縮脲法（biuret法）靈敏度低1～20mg中速20~30分鐘多肽鍵＋鹼性cu2＋®紫色絡合物硫酸銨；tris緩衝液；某些氨基酸用於快速測定，但不太靈敏；不同蛋白質顯色相似
紫外吸收法較為靈敏50～100mg快速5～10分鐘蛋白質中的酪氨酸和色氨酸殘基在280nm處的光吸收各種嘌吟和嘧啶；
folin－酚試劑法（lowry法）靈敏度高～5mg慢速40～60分鐘雙縮脲反應；磷鉬酸－磷鎢酸試劑被tyr和phe還原硫酸銨；tris緩衝液；甘氨酸；
各種硫醇耗費時間長；操作要嚴格計時；顏色深淺隨不同蛋白質變化
考馬斯亮藍法(bradford法)靈敏度最高1～5mg快速5～15分鐘考馬斯亮藍染料與蛋白質結合時，其lmax由465nm變為595nm強鹼性緩衝液；
sds最好的方法；干擾物質少；顏色穩定；顏色深淺隨不同蛋白質變化
紫外分光光度法測定蛋白質含量的方法有何優缺點受哪些因素的影響和限制
7樓：
紫外分光光度復法測定製蛋白質含量的方bai法有何優缺點？受哪些du因素的影響和限制
zhi？dao
答：優點是：方法簡單、靈敏、快速、高選擇性，且穩定性好，不消耗樣品，低濃度的鹽類不干擾測定。
缺點是：儀器昂貴，而且不同的蛋白質的紫外吸收是不相同的，測定結果存在著一定的誤差，受光源、溶液的ph值、比色皿材質、緩衝介質溶液等因素的影響和限制。
常用來測定蛋白質含量的方法有哪些？優缺點是什麼？
8樓：王王王小六
1、凱氏定氮法
凱氏定氮法是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法。即在有催化劑的條件下，用濃硫酸消化樣品將有機氮都轉變成無機銨鹽，然後在鹼性條件下將銨鹽轉化為氨，隨水蒸氣蒸餾出來併為過量的硼酸液吸收，再以標準鹽酸滴定，就可計算出樣品中的氮量。
由於蛋白質含氮量比較恆定，可由其氮量計算蛋白質含量，故此法是經典的蛋白質定量方法。
優點：可用於所有食品的蛋白質分析中；操作相對比較簡單；實驗費用較低；結果準確，是一種測定蛋白質的經典方法；用改進方法（微量凱氏定氮法）可測定樣品中微量的蛋白質。
缺點：凱氏定氮法只是一個氧化還原反應,把低價氮氧化並轉為氨鹽來測定,而不能把**氮還原為氮鹽的形式,所以不可以測出物質中所有價態的氮含量。
2、雙縮脲法
雙縮脲法是一個用於鑑定蛋白質的分析方法。雙縮脲試劑是一個鹼性的含銅試液，呈藍色，由1%氫氧化鉀、幾滴1%硫酸銅和酒石酸鉀鈉配製。
當底物中含有肽鍵時（多肽），試液中的銅與多肽配位，配合物呈紫色。可通過比色法分析濃度，在紫外可見光譜中的波長為540nm。鑑定反應的靈敏度為5-160mg/ml。
鑑定反應蛋白質單位1-10mg。
優點：測定速度較快，干擾物質少，不同蛋白質產生的顏色深淺相近。
缺點：①靈敏度差； ② 三羥甲基氨基甲烷、一些氨基酸和edta等會干擾該反應。
3、酚試劑法
取6支試管分別標號，前5支試管分別加入不同濃度的標準蛋白溶液，最後一支試管加待測蛋白質溶液，不加標準蛋白溶液，在室溫下放置30分鐘，以未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照，於650nm波長處測定各管中溶液的吸光度值。
優點：靈敏度高，對水溶性蛋白質含量的測定很有效。
缺點：①費時，要精確控制操作時間；②酚法試劑的配製比較繁瑣。
4、紫外吸收法
大多數蛋白質在280nm波長處有特徵的最大吸收，這是由於蛋白質中有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸存在，可用於測定0.1～0.5mg/ml含量的蛋白質溶液。
取9支試管分別標號，前8支試管分別加入不同濃度的標準蛋白溶液，1號試管不加標準蛋白溶液，最後一支試管加待測蛋白質溶液，而不加標準蛋白溶液，每支試管液體總量通過加入蒸餾水補足而保持一致，將液體混合均勻，在280nm波長處進行比色，記錄吸光度值。
優點：簡便、靈敏、快速，不消耗樣品，測定後能**。
缺點：①測定蛋白質含量的準確度較差，專一性差； ②干擾物質多，若樣品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等能吸收紫外光的物質，會出現較大的干擾。
5、考馬斯亮藍法
考馬斯亮藍顯色法的基本原理是根據蛋白質可與考馬斯亮藍g-250 定量結合。當考馬斯亮藍 g-250 與蛋白質結合後，其對可見光的最大吸收峰從 465nm 變為 595nm。
在考馬斯亮藍 g-250 過量且濃度恆定的情況下，當溶液中的蛋白質濃度不同時，就會有不同量的考馬斯亮藍 g-250 從吸收峰為 465nm 的形式轉變成吸收峰為 595nm 的形式，而且這種轉變有一定的數量關係。
一般情況，當溶液中的蛋白質濃度增加時，顯色液在 595nm 處的吸光度基本能保持線性增加，因此可以用考馬斯亮藍 g-250 顯色法來測定溶液中蛋白質的含量。
優點：靈敏度高，測定快速、簡便，干擾物質少，不受酚類、遊離氨基酸和緩衝劑、絡合劑的影響，適合大量樣品的測定。
缺點：由於各種蛋白質中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此用於不同蛋白質測定時有較大的偏差。
蛋白質含量高的食物有哪些，哪些食物含蛋白質高
蘑菇為高蛋白低脂肪食品,有降血糖 降血脂作用。五種高蛋白低脂肪的肉類 兔肉 兔肉與一般畜肉的成分有所不同，其特點是 含蛋白質較多，每百克兔肉中含蛋白質21.5克 含脂肪少，每百克僅含脂肪0.4克 含有豐富的卵磷脂 含膽固醇較少，每百克含膽固醇只有83毫克。由於兔肉含蛋白質較多，營養價值較高，含脂肪較...
那種食物蛋白質最高呀？蛋白質含量高的食物有哪些
豆類 蛋類 肉類 海鮮類的蛋白質高。含蛋白質最高的食物如下 1 豆類和豆製品，比如紅豆 綠豆 黃豆 黑豆 豆腐 豆漿，這些豆類和豆製品當中往往都含有豐富的蛋白質。2 蛋類食物，比如雞蛋 鴨蛋 鵝蛋 鵪鶉蛋，這些蛋類食物當中也含有很多蛋白質。3 各種動物的肉類，比如瘦豬肉 瘦牛肉 瘦羊肉 蝦肉 魚肉，...
蝦的蛋白質含量是多少
每100克蝦中含364克蛋白質。不管何種蝦，都含有豐富的蛋白質，營養價值很高，其肉質和魚一樣鬆軟，易消化，而且無腥味和骨刺，同時含有豐富的礦物質 如鈣 磷 鐵等 海蝦還富含碘質，對人類的健康極有裨益。根據科學的分析，蝦可食部分蛋白質佔16 20 左右。淡水蝦性溫味甘 微溫，入肝 腎經。蝦肉有補腎壯陽...