PCR技術中為什麼不用解旋酶,PCR技術中為什麼不用解旋酶

時間 2021-08-30 09:11:41

1樓:匿名使用者

原因如下:

1、解旋酶一般只能開啟很短一部分的dna雙螺旋,在具體pcr操作的時候無法控制其具體在什麼時間。

2、不能保證dna解旋酶解開dna的那段時間足夠長以便讓引物和模板結合,而且引物和模板結合後,解旋酶還能立刻移開以免阻礙dna合成酶的前進。

聚合酶鏈式反應為一種用於放大擴增特定的dn**段的分子生物學技術,可看作是生物體外的特殊dna複製,pcr的最大特點是能將微量的dna大幅增加。

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標準的pcr過程分為三步:

1、dna變性:(90℃-96℃):雙鏈dna模板在熱作用下,氫鍵斷裂,形成單鏈dna。

2、退火:(60℃-65℃):系統溫度降低,引物與dna模板結合,形成區域性雙鏈。

3、延伸:(70℃-75℃):在taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dntp為原料,從引物的3′端開始以從5′→3′端的方向延伸,合成與模板互補的dna鏈。

2樓:北京索萊寶科技****

之所以不用解旋酶是因為難以控制。

解旋酶一般只能開啟很短一部分的dna雙螺旋,在具體pcr操作的時候無法控制其具體在什麼時間開啟那一段dna,更無法控制其具體能作用多少時間。詳細一點說,我們沒有辦法知道dna解旋酶開啟的是模板dna與引物結合的部分,還是不結合的部分,還是乾脆分開了和模板結合的引物;我們也不能保證dna解旋酶解開dna的那段時間足夠長以便讓引物和模板結合,而且引物和模板結合後,解旋酶還能立刻移開以免阻礙dna合成酶的前進;我們更沒法讓dna在複製的過程中,dna解旋酶一直走在複製叉的前方來幫助dna複製等等。有很多不可控的因素使得我們現階段不可能在體外讓dna解旋酶按照我們希望的模式來工作。

在細胞內,解旋酶需要dna複製複合物(下圖)的幫助才可以精密地調節dna的複製,在體外實驗中,每多引入一種蛋白質就會讓實驗體系更加複雜、更加難以控制、更加高成本,所以dna變性的工作就都交給高溫了。

3樓:匿名使用者

dna雙鏈的解旋是邊解旋邊複製,單鏈不能存在很長時間就復性了。而且解旋酶在體外作用的條件也比較負責,成本比較高。

pcr的意義在於大量的得到gene拷貝,還是高溫變性效果穩定,成本低。

當然也許你所提的是一個更好的idea

學術無禁區

4樓:

pcr儀其實就是一個高階的“電爐子”,它可以瞬間的升高或降低溫度,大約每秒種6攝氏度。

第一步:高溫解旋,大約加溫到90多度吧(大概是),dna雙鏈氫鍵斷裂瞬間解旋

第二步:退火,你應該聽說過吧,pcr儀大約在十秒之內吧溫度降到60多度,這時“引物”會搶在雙鏈形成氫鍵之前結合上去。

第三步:dnmp開始結合上去,合成開始了,都是5'端向3'端進行,不會出現岡奇片斷,因為dna已經解開了,哈哈

為什麼 pcr方法擴增目的基因 不用解旋酶

5樓:匿名使用者

pcr體系沒有細胞內環境

6樓:匿名使用者

pcr技術主復要有3個過程

變性:加熱至90~制95℃雙鏈dna解鏈成為單bai鏈dna

退火du:冷卻至55~60℃部分引物與模板的單zhi鏈dna的特定dao互補部位相配對和結合延伸:加熱至70~75℃以目的基因為模板,合成互補的新dna鏈dna雙鏈在高溫下氫鍵自然斷裂,所以不需要dna解旋酶。

7樓:士誠小人也

解旋酶是在體內溫度下發揮作用的,在這個溫度下,dna雙螺旋比較穩定

而pcr是通過高溫來使得dna雙螺旋變性解鏈的,在94度左右的情況下,沒必要使用解旋酶,雙鏈dna基本上已經解鏈成為單鏈dna了

8樓:匿名使用者

解旋酶在高溫下會變性,而pcr是在高溫下進行的

pcr技術解旋需要解旋酶嗎

9樓:

不需要吧。不是高溫自動解旋嗎?

10樓:匿名使用者

不需要~

需要taq酶(dna合成酶類),pcr級水,原料dntps,以及磷酸緩衝液。

dna雙鏈的解開是通過高溫(94攝氏度)來實現的,並不是通過酶類,另外,pcr的溫度那麼高,要是使用解旋酶的話豈不是早就失活啦?呵呵

11樓:匿名使用者

不用。加熱90-95攝氏度自動解旋。

沒必要為這個和老師吵,他說沒有肯定就是沒有呀……

12樓:匿名使用者

不用,加熱到93攝氏度時dna會自動解旋

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